代谢组学概念:代谢组学(metabonomics/metabolomics)是效仿基因组学和蛋白质组学的研究思想,对生物体内所有代谢物进行定量分析,并寻找代谢物与生理病理变化的相对关系的研究方式,是系统生物学的组成部分。其研究对象大都是相对分子质量1000以内...
常规蛋白质组学:Labelfree多肽组学:顾名思义,就是不使用任何标记方法,直接对肽段进行质谱鉴定和定性定量分析。实验流程简单,只需要对蛋白进行常规酶解和除盐步骤即可上机。定量方式分为两种:峰面积(Peakintensity)和峰计数(Spectralcou...
蛋白质组学在生物学领域的研究中的应用是怎样的?研究对象涉及到生物体且生物体内表达蛋白,理论上都可以应用蛋白质组学。蛋白质组学是以研究生物体蛋白组成及其变化规律为目的的应用科学。主要使用的仪器为液质联用高分辨率质谱仪。详细来说,蛋白质组学包含许多分支:非标定量蛋...
代谢组学研究方法:代谢组学的研究方法与蛋白质组学的方法类似,通常有两种方法。一种方法称作代谢物指纹分析 (metabolomic fingerprinting),采用液相色谱-质谱联用(LC-MS)的方法,比较不同血样中各自的代谢产物以确定其中所有的代谢产物。...
代谢组学需要多少的生物学重复?生物学重复指的是相同处理的相同类型的生物样本的数量(如相同剂量给药后2小时的小鼠采集并且相同储存条件和处理方法血清样本)。相较于基因和蛋白,代谢物处于生命活动的下游,收到环境和遗传背景等因素影响较大,生物学重复少可能会放大组内差异...
蛋白磷酸化检测方法:一、Western Blot检测方法优势:1. WB方法简便,多数实验室具备Western Blot设备条件。2. 许多磷酸化抗体十分灵敏,能够检测低至10ug的蛋白样品。3. 对于丰度低的蛋白,可以先通过IP使用目标蛋白的抗体对目标蛋白进...
蛋白质组学:质谱分析蛋白质组学的基本原理主要是通过测定被测样品离子的理化性质来进行分析,根据样品的质量谱图和相关信息从而得到定性和定量结果。目前,蛋白质组学质谱分析一般是根据保留时间(retentiontime)、质荷比(m/z)、离子强度(intensity...
常规蛋白质组学:Labelfree多肽组学:顾名思义,就是不使用任何标记方法,直接对肽段进行质谱鉴定和定性定量分析。实验流程简单,只需要对蛋白进行常规酶解和除盐步骤即可上机。定量方式分为两种:峰面积(Peakintensity)和峰计数(Spectralcou...
蛋白质乙酰化修饰鉴定流程:1. 组织/细胞破碎,提取、提纯目的蛋白质。2. 使用胰蛋白酶将目的蛋白酶解成多肽片段。3. 使用高效特异性乙酰化抗体对乙酰化修饰肽段进行免疫富集。4. 使用LC-MS/MS对富集的乙酰化肽段进行鉴定分析。5. 数据分析,并对鉴定的乙...
代谢组学比较常用到的数据分析方法:代谢组学分析数据用于统计分析时,数据集通常为一个N × K的矩阵(X矩阵),N表示N个样本数,每一行表示一个样品, K表示K个变量,每一列表示一个变量,在代谢组学中变量通常是指代谢物含量。单变量分析方法只分别分析单个变量,不考...
单细胞转录组学技术:10×genomics技术:首先在凝胶微珠上种上特定的DNA的片段,DNA的片段由三部分组成:Barcode、UMI、PolyT组成。Barcode是16个碱基的长度。一共有400万种Barcode,一个微珠是对应于一种Barcode,通过...
代谢组学样本收集指南:1.血浆样本收集:(1)从合适的静脉采集血液(典型10mL)到标记的肝素锂血浆收集管中(肝素锂用作抗凝剂)。(2)立即于4 °C离心(3000g)20min,上清液即为血浆。(3)离心完毕,取出血浆收集管,取上清液(血浆),分等份(0.5...
代谢组学样本收集注意事项:1.对于动物组织样本无法满足50mg/样,如海马组织,大脑组织等,可考虑同组混样以达到50mg/样的要求。2.对于含水量高的果实进行取样很难保持高度均一性(如番茄的果皮、果肉等),建议将整个果实进行液氮研磨后冻干混匀,对混匀后的粉末进...
蛋白质组学:常用技术:靶向蛋白组(PRM靶向蛋白/肽段定量),修饰蛋白组学(定量磷酸化修饰组学、定量糖基化修饰蛋白组学、定量乙酰化修饰蛋白组学和定量泛素化修饰蛋白组学),互作蛋白组学(代谢物与蛋白互作研究)。什么样本能做蛋白组学检测?大概可以测到多少的蛋白种类...
代谢组学有哪些应用?近年来,代谢组学技术得到了迅速发展,主要可应用于:功能基因组学、疾病早期诊断、病因病机研究、药物毒理学、中医药现代化、植物代谢组学、微生物代谢组学、营养学、环境科学等生命科学的各个领域。为什么要选择代谢组学?首先需要明确的是代谢组学的目标分...
靶向代谢组学的一般分析流程为:1. 数据采集 第1步是得到标准品。如果无法从市场上买到,就必须定制合成。然后通过优化产物离子碰撞能量以得到的信号,再通过测定三重串联四极杆测定代谢物的 MRM 跃迁值。2. 定量 接下来用定量分析软件对 MRM 数据进行处理,得...
我们究竟怎么研究蛋白质组学呢?抗体免疫的方法呢,其实就是ELISA,Western及蛋白质芯片。通过合成大量蛋白质特异的抗体,能够进行定性检测及相对定量分析,只要你有好用的抗体,那么就可以通过免疫反应让抗体快速的识别你感兴趣的蛋白质,然后用例如HRP发光等标记...
什么是蛋白质的翻译后修饰?蛋白质的翻译后修饰(post-translational-modification-analysis.html)是指蛋白质在翻译后的化学修饰。对于大部分的蛋白质来说,这是蛋白质生物合成的较后步骤。PTM是细胞信号传导中的重要组成部分。...
蛋白翻译后修饰:蛋白质氨基酸序列的特定位置可以与化学基团或者小分子量的蛋白共价结合从而发生蛋白质翻译后修饰(post-translational modifications,PTMs)。翻译后修饰是蛋白质生物合成的一个步骤,翻译后多肽链在成为成熟的蛋白质产品之...
蛋白翻译后修饰组学技术在准确医学中的应用:尽管目前大数据的获得会采用基因组学和转录组学,但是关键的发现还是依赖蛋白质组数据而得到的。近来越来越多的研究表明蛋白组学驱动的准确的医学具有极大的实用性和普适性,蛋白组学的研究更加速了临床转化的进程。蛋白翻译后修饰(p...
蛋白磷酸化检测方法:一、Western Blot检测方法优势:1. WB方法简便,多数实验室具备Western Blot设备条件。2. 许多磷酸化抗体十分灵敏,能够检测低至10ug的蛋白样品。3. 对于丰度低的蛋白,可以先通过IP使用目标蛋白的抗体对目标蛋白进...
代谢组学疾病诊断应用:与基因组学和蛋白质组学相比, 代谢组学的研究侧重于相关特定组分的共性,是要涉及研究每一个代谢组分的共性、特性和规律,目前据此目标相距甚远。尽管充满了挑战,研究人员仍然坚信,与基因组学和蛋白质组学相比,代谢组学与生理学的联系更加紧密。疾病导...
蛋白翻译后修饰组学技术在准确医学中的应用:尽管目前大数据的获得会采用基因组学和转录组学,但是关键的发现还是依赖蛋白质组数据而得到的。近来越来越多的研究表明蛋白组学驱动的准确的医学具有极大的实用性和普适性,蛋白组学的研究更加速了临床转化的进程。蛋白翻译后修饰(p...
单细胞转录组学基本概念:普通转录组的思路也可以应用到单细胞转录组。普通转录组相当于把一群细胞混合到一起去提取RNA,获得的是每个细胞中RNA表达量的平均值。单细胞是把每个细胞单独分出来去提取RNA,然后建库测序,获得是是单个细胞的表达值。在每个细胞里面基因的表...
单细胞转录组学基本概念:普通转录组的思路也可以应用到单细胞转录组。普通转录组相当于把一群细胞混合到一起去提取RNA,获得的是每个细胞中RNA表达量的平均值。单细胞是把每个细胞单独分出来去提取RNA,然后建库测序,获得是是单个细胞的表达值。在每个细胞里面基因的表...
蛋白质修饰位点分析:基于LC-MS/MS分析能够精确测定蛋白质或多肽分子质量这一特性,从而检测蛋白质或者多肽上位点发生何种修饰。可检测修饰类型如下: 磷酸化、糖基化、乙酰化、泛素化、丙酰化、丁酰化、丙二酰化、戊二酰化、琥珀酰化、单甲基化、二甲基化、三甲基化。1...
PRM靶向蛋白组学:PRM技术是一种根据已知实测信息或质谱检测规律的假定信息对样品中的蛋白质进行靶向定量的技术。该技术主要应用仪器为QExactive系列质谱仪,首先以四极杆作为质量过滤器,特异性地选择与预先设定质荷比相同的肽段离子(母离子)通过,随后在高能碰...
PRM靶向蛋白质组学:产品分类:a.相对定量(目的同WB)。b.一定定量(目的同Elisa)。技术优势:(1)无需抗体,可直接对样本中目标蛋白质进行定量分析。(2)高特异性、准确度和灵敏度,靶向检测目标蛋白对应的多个unique肽段。(3)通量高,可以同时实现...
代谢组学研究方法:代谢组学的研究方法与蛋白质组学的方法类似,通常有两种方法。一种方法称作代谢物指纹分析 (metabolomic fingerprinting),采用液相色谱-质谱联用(LC-MS)的方法,比较不同血样中各自的代谢产物以确定其中所有的代谢产物。...
代谢组学的研究分为靶向和非靶向。通俗说就是你有没有目标分子。传统代谢组学研究利用的是GC-MS,因为代谢物大多数都不是高沸点的,而且GC-MS有庞大的数据库检索。然后发展的LC-MS差不多,就是克服了一些高沸点物质难以检测的弊端。NMR用于代谢组学不是很多,一...