蛋白磷酸化检测方法：一、Western Blot检测方法优势：1. WB方法简便，多数实验室具备Western Blot设备条件。2. 许多磷酸化抗体十分灵敏，能够检测低至10ug的蛋白样品。3. 对于丰度低的蛋白，可以先通过IP使用目标蛋白的抗体对目标蛋白进行富集，再进行WB检测被磷酸化的蛋白，检测效率可以提高几倍甚至几十倍。二、质谱检测方法：Western Blot的方法虽然简便，但是对于大规模分析复杂的生物样品的磷酸化水平就不再适用了。而质谱却能很好的解决这一问题。依靠高准确度质谱仪，如今快速准确分析细胞中高丰度蛋白的磷酸化修饰已是非常简单的事。具体的检测方法为先通过SDS-PAGE胶，或者2D-PAGE胶等分离目标蛋白，将含有目标蛋白的条带切下，胰酶消化，LC-MS/MS检测分析蛋白序列和相应位点的磷酸化修饰。这个方法适用于同时检测多个目标蛋白的磷酸化水平。蛋白磷酸化修饰过程是通过蛋白激酶催化，将磷酸基团从ATP转移到多肽底物的丝氨酸、或酪氨酸残基上。杭州丙?；奘蔚鞍字首檠Х治鲅芯?/p>
蛋白质学组翻译后修饰自下而上分析策略：常用的糖蛋白分离和富集技术有：a. 凝集素亲和技术；b. 肼化学富集；c. 亲水性相互作用色谱法；d. β-消除/迈克尔加成反应?；谥势椎奶堑鞍准ê吞腔坏悴舛ǚ椒ㄓ校篴. PNGase F酶法；b. Endo H酶法；c. 三氟甲烷磺酸(TFMS)法。泛素化：泛素是一种由76个氨基酸组成的多肽，在真核生物中高度保守，可通过异肽键与目标蛋白赖氨酸残基的氨基进行共价连接。泛素化蛋白的富集主要基于标记，泛素用亲和标签（通常为6xHis）进行标记，并通过镍螯合色谱亲和提取泛素化蛋白。由于泛素的C端为Arg-Gly-Gly结构，经胰蛋白酶水解后，Gly-Gly保留在修饰蛋白的肽链上，使肽的质量增加114，因此可作为泛素定位位点的质量标记。用HPLC对样品进行预分离，使用针对特定残留结构的抗体富集泛素化肽，可很大程度上提高泛素化蛋白的浓度。串联质谱可以鉴定泛素化位点。江苏亚硝基化修饰蛋白质组学价钱乙?；奘问翘迥诒Ｊ氐目赡孀牡鞍仔奘?。
蛋白质翻译后修饰：蛋白质的翻译后修饰通过可逆的共价键将小分子或蛋白质与底物蛋白质上特定的氨基酸结合，调控着底物的酶活性、功能以及三级结构的变化。各种蛋白质翻译后修饰在信号通路和网络中发挥着重要的作用，翻译后修饰系统的紊乱将导致一系列疾病的发生。通过实验的方法鉴定蛋白质翻译后修饰的位点需要耗费大量的资金和时间，并且酶反应的优化常常难以实现。而计算的方法则能够快速、准确的预测酶特异性的底物蛋白质及其修饰位点。
蛋白磷酸化修饰过程：蛋白磷酸化修饰这一过程是通过蛋白激酶催化，将磷酸基团从ATP转移到多肽底物的丝氨酸、苏氨酸，或酪氨酸残基上。并且磷酸化修饰的过程是可逆的，去磷酸化反应由蛋白磷酸酶催化完成。蛋白磷酸化检测方法：Western Blot检测方法：Western Blot是检测蛋白磷酸化水平的常用方法，主要过程为先利用SDS-PAGE分离蛋白质，随后将蛋白质转移到PVDF膜上，然后使用特异性识别磷酸化蛋白的抗体来鉴定目标蛋白的磷酸化水平。只有被磷酸化修饰的蛋白才会在相应分子质量的地方显现特异性蛋白条带。蛋白质翻译后修饰的作用主要是改变蛋白质的功能。
蛋白质翻译后修饰有什么生物学意义？可以使蛋白质具有生物活性，可以发挥相应的功能。翻译是蛋白质生物合成（基因表达中的一部分，基因表达还包括转录）过程中的第二步（转录为第1步），翻译是根据遗传密码的中心法则，将成熟的信使RNA分子（由DNA通过转录而生成）中“碱基的排列顺序”（核苷酸序列）解码，并生成对应的特定氨基酸序列的过程。但也有许多转录生成的RNA，如转运RNA（tRNA）、核糖体RNA（rRNA）和小核RNA（snRNA）等并不被翻译为氨基酸序列。蛋白质翻译后修饰是指对翻译后的蛋白质进行共价加工的过程。浙江棕榈?；奘蔚鞍字首檠а芯?/p>
蛋白质糖基化是一种常见的蛋白质翻译后修饰。杭州丙?；奘蔚鞍字首檠Х治鲅芯?/p>
蛋白质泛素化修饰组学技术：泛素化修饰是一种重要的翻译后修饰。泛素-蛋白酶体系统介导了真核生物体内80%~85%的蛋白质降解。此外，泛素化修饰还可以直接影响蛋白质的活性和定位，调控包括细胞周期、细胞凋亡、转录调控、DNA 损伤修复以及免疫应答等在内的多种细胞活动。样品要求：1、SDS-PAGE条带：5个以上可见考染条带。2、溶液（目标蛋白质）：目标蛋白总量>50μg，目标蛋白浓度>80%。3、溶液（大规?；旌系鞍字剩旱鞍鬃芰?1mg，蛋白浓度>1μg/μl。杭州丙?；奘蔚鞍字首檠Х治鲅芯?/p>
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