蛋白磷酸化检测方法：一、Western Blot检测方法优势：1. WB方法简便，多数实验室具备Western Blot设备条件。2. 许多磷酸化抗体十分灵敏，能够检测低至10ug的蛋白样品。3. 对于丰度低的蛋白，可以先通过IP使用目标蛋白的抗体对目标蛋白进行富集，再进行WB检测被磷酸化的蛋白，检测效率可以提高几倍甚至几十倍。二、质谱检测方法：Western Blot的方法虽然简便，但是对于大规模分析复杂的生物样品的磷酸化水平就不再适用了。而质谱却能很好的解决这一问题。依靠高准确度质谱仪，如今快速准确分析细胞中高丰度蛋白的磷酸化修饰已是非常简单的事。具体的检测方法为先通过SDS-PAGE胶，或者2D-PAGE胶等分离目标蛋白，将含有目标蛋白的条带切下，胰酶消化，LC-MS/MS检测分析蛋白序列和相应位点的磷酸化修饰。这个方法适用于同时检测多个目标蛋白的磷酸化水平。目前对乙?；奘蔚墓δ苎芯恐饕性诙韵赴嫉骺?，以及对代谢通路的调控这两个方面。上海丙二酰化修饰蛋白质组学一般流程
蛋白质磷酸化修饰组学：磷酸化蛋白质是由蛋白激酶将ATP或GTP分子上的磷酸基团转移到底物蛋白特定的氨基酸侧链上形成的。蛋白质磷酸化是一种可逆的蛋白质翻译后修饰。在哺乳动物的细胞生命周期中，至少有三分之一的蛋白质发生磷酸化修饰。磷酸化修饰参与许多信号转导途径和细胞代谢过程，且许多已知的疾病也与蛋白质的异常磷酸化有关。因此，对磷酸化蛋白质组进行定量研究，寻找差异表达的磷酸化蛋白质，有助于发现疾病的生物标志物和寻找新的具有诊疗潜力的药物靶标。杭州蛋白质棕榈?；奘巫檠а芯康鞍字柿姿峄奘巫檠Ь哂刑剿餍?。
蛋白质翻译后修饰组学：血浆蛋白糖基化修饰分析：蛋白质糖基化指碳水化合物通过共翻译或翻译后修饰的方式附着到蛋白质上的过程，是一种常见的蛋白质翻译后修饰。分泌的细胞外蛋白常被糖基化，糖基化蛋白通常是重要的整合膜蛋白。血浆中的蛋白质包括维持机体正常生理状态的蛋白质和机体分泌、渗漏、脱落的蛋白质，其中不乏存在一些糖基化蛋白质。而蛋白质糖基化修饰不只影响蛋白质的空间构象、生物活性、运输和定位，而且在分子识别、细胞通信、信号转导等特定生物过程中发挥着至关重要的作用。因此对血浆蛋白糖基化进行分析，有助于研究血浆蛋白的生理功能等。
蛋白质磷酸化修饰组学：蛋白质的磷酸化修饰是生物体内重要的共价修饰方式之一。磷酸化修饰本身所具有的简单、灵活、可逆的特性，以及磷酸基团的供体ATP的易得性，使得磷酸化修饰被真核细胞所选择接受成为一种比较普遍的调控手段。蛋白质的磷酸化和去磷酸化这一可逆过程，几乎调节着包括细胞的增殖、发育、分化、细胞骨架调控、细胞凋亡、神经活动、肌肉收缩、新陈代谢发生等生命活动的所有过程，并且可逆的蛋白质磷酸化是目前所知道的比较主要的信号转导方式。目前已经知道有许多人类疾病是由于异常的磷酸化修饰所引起，而有些磷酸化修饰却是某种疾病所导致的后果。乙?；奘问翘迥诟叨缺Ｊ氐目赡孀牡鞍仔奘?。
蛋白质学组翻译后修饰自下而上分析策略：常用的糖蛋白分离和富集技术有：a. 凝集素亲和技术；b. 肼化学富集；c. 亲水性相互作用色谱法；d. β-消除/迈克尔加成反应?；谥势椎奶堑鞍准ê吞腔坏悴舛ǚ椒ㄓ校篴. PNGase F酶法；b. Endo H酶法；c. 三氟甲烷磺酸(TFMS)法。泛素化：泛素是一种由76个氨基酸组成的多肽，在真核生物中高度保守，可通过异肽键与目标蛋白赖氨酸残基的氨基进行共价连接。泛素化蛋白的富集主要基于标记，泛素用亲和标签（通常为6xHis）进行标记，并通过镍螯合色谱亲和提取泛素化蛋白。由于泛素的C端为Arg-Gly-Gly结构，经胰蛋白酶水解后，Gly-Gly保留在修饰蛋白的肽链上，使肽的质量增加114，因此可作为泛素定位位点的质量标记。用HPLC对样品进行预分离，使用针对特定残留结构的抗体富集泛素化肽，可很大程度上提高泛素化蛋白的浓度。串联质谱可以鉴定泛素化位点。蛋白质修饰可检测修饰类型有磷酸化、糖基化、乙?；?、泛素化、丙酰化、丁?；?、丙二酰化。杭州蛋白质棕榈?；奘巫檠а芯?/p>
泛素化修饰还可以直接影响蛋白质的活性和定位。上海丙二?；奘蔚鞍字首檠б话懔鞒?/p>
蛋白质乙酰化修饰组学技术：乙酰化修饰是体内高度保守的可逆转的蛋白修饰，对细胞核内转录调控因子的刺激有着非常重要的作用。此外，还存在大量的非组蛋白乙酰化修饰参与了代谢通路及代谢酶活性的调节。乙?；奘巫檠Ъ际醴癫捎秒亩卧し掷虢档透叻岫茸榈鞍锥缘鞍滓阴；ǖ挠跋?，再结合免疫共沉淀通过高效的抗体富集乙酰化的肽段，从而实现大规模乙?；募岸?。蛋白质泛素化修饰组学技术：泛素化修饰是一种重要的翻译后修饰。泛素-蛋白酶体系统介导了真核生物体内80%~85%的蛋白质降解。此外，泛素化修饰还可以直接影响蛋白质的活性和定位，调控包括细胞周期、细胞凋亡、转录调控、DNA 损伤修复以及免疫应答等在内的多种细胞活动。上海丙二?；奘蔚鞍字首檠б话懔鞒?/p>
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