靶向代谢组学分析成功的关键因素是准确度、高通量和可靠性。靶向代谢组学鉴定一般采用 GC/MS 系统的选择性离子监测 (SIM),或在三重串联四极杆 LC/MS 系统上用多反应离子监测 (MRM) 进行靶向 MS/MS。SIM 比全扫描图谱采集具有更高的灵敏度,...
我们究竟怎么研究蛋白质组学呢?抗体免疫的方法呢,其实就是ELISA,Western及蛋白质芯片。通过合成大量蛋白质特异的抗体,能够进行定性检测及相对定量分析,只要你有好用的抗体,那么就可以通过免疫反应让抗体快速的识别你感兴趣的蛋白质,然后用例如HRP发光等标记...
蛋白磷酸化修饰过程:蛋白磷酸化修饰这一过程是通过蛋白激酶催化,将磷酸基团从ATP转移到多肽底物的丝氨酸、苏氨酸,或酪氨酸残基上。并且磷酸化修饰的过程是可逆的,去磷酸化反应由蛋白磷酸酶催化完成。蛋白磷酸化检测方法:Western Blot检测方法:Western...
代谢组学疾病诊断应用: 代谢组学研究人员已经对此进行了研究。新生儿是否缺失酶基因,可以在出生时就检测出来。可检测出包括涉及合成途径中的基本成分(如氨基酸)的酶。酶缺失的结果就是相应的代谢产物过少或过多。尿症(PKU)是一种常见的婴儿疾病。这种疾病是由于缺失将苯...
蛋白质乙酰化修饰定义:蛋白质在细胞中经过翻译后,到被运输到相应的细胞器并且发生特定的生物学作用前会经过很重要的一步加工,那就是蛋白质翻译后修饰加工。蛋白质翻译后修饰的作用主要是改变蛋白质的活性、定位或功能。通过蛋白质翻译后修饰也进一步增加了细胞通路机制和生命活...
代谢组学发展至今,代谢组学技术已经远远超出了标准临床化学技术的范围,能够精确分析数百至数千种代谢物。代谢组学提供了代谢表型的详细表征,并可以在许多水平上进行精密医学研究,包括表征疾病基础的代谢紊乱,发现新的治靶标以及发现可用于诊断疾病或监测药物的活性。比较常见...
蛋白质乙酰化修饰组学定量分析:1. SILAC细胞标记,组织/细胞破碎,提取、提纯目的蛋白质(基于SILAC的乙酰化修饰组学定量)。2. 使用胰蛋白酶将目的蛋白酶解成多肽片段。3. 对多肽片段进行iTRAQ标记(基于iTRAQ的乙酰化修饰组学定量)。4. 使用...
转录组是特定发育阶段或生理条件下细胞内的完整转录信息的汇合,表示了基因表达的中间状态。转录组测序可以对所有转录物进行分类、确定基因的转录结构、量化转录物的表达水平。蛋白质是生命功能的直接执行者,蛋白组是一种细胞乃至一种生物所表达的全部蛋白质。整合转录组学和蛋白...
PRM靶向蛋白质组学:是一种基于Orbitrap为表示的高分辨、高精度质谱的离子监视技术,首先利用四级杆质量分析器的选择能力,用Q1选择目标肽段的母离子,随后在collisioncell中对母离子进行碎裂,然后利用Orbitrap分析器在二级质谱中检测所选择的...
蛋白质学组翻译后修饰自下而上分析策略:常用的糖蛋白分离和富集技术有:a. 凝集素亲和技术;b. 肼化学富集;c. 亲水性相互作用色谱法;d. β-消除/迈克尔加成反应。基于质谱的糖蛋白鉴定和糖基化位点测定方法有:a. PNGase F酶法;b. Endo H酶...
质谱分析蛋白翻译后修饰:相对于蛋白质印迹等技术,质谱技术能更有效的对蛋白质的翻译后修饰进行分析,且可以对常规的Western blot 翻译后修饰蛋白鉴定进行补充。质谱分析蛋白翻译后修饰一般使用自下而上的基于肽段的方法。但是自下而上的质谱方法无法保证可以完全识...
代谢组学疾病诊断应用: 代谢组学研究人员已经对此进行了研究。新生儿是否缺失酶基因,可以在出生时就检测出来。可检测出包括涉及合成途径中的基本成分(如氨基酸)的酶。酶缺失的结果就是相应的代谢产物过少或过多。尿症(PKU)是一种常见的婴儿疾病。这种疾病是由于缺失将苯...
蛋白质糖基化修饰组学技术:糖基化是在酶的控制下,蛋白质或脂质附加上糖类的过程,发生于内质网和高尔基体等部位。在糖基转移酶作用下将糖转移至蛋白质,和蛋白质上的氨基酸残基共价结合。蛋白质经过糖基化作用,形成糖蛋白。糖基化是对蛋白的重要的修饰作用,有调节蛋白质功能作...
翻译后修饰蛋白的检测方法:翻译后修饰蛋白的检测技术包括有免疫沉淀、western blot、质谱技术、体外生化分析等。其中,免疫沉淀是大多数翻译后修饰检测中的关键步骤,它利用蛋白特异性抗体或某种翻译后修饰的特异性抗体来富集目标蛋白,之后再用western bl...
单细胞RNA-seq转录组学工作流程:单细胞RNA测序等高通量单细胞转录组学技术通常从针对不同瘤和组织类型(解离、分选和分离细胞等)量身定制的实验工作流程开始,然后产生可以比对的序列,量化、质量控制(QC)过滤和以不同方式标准化,以实现许多下游计算分析,例如聚...
翻译后修饰蛋白的检测方法:翻译后修饰蛋白的检测技术包括有免疫沉淀、western blot、质谱技术、体外生化分析等。其中,免疫沉淀是大多数翻译后修饰检测中的关键步骤,它利用蛋白特异性抗体或某种翻译后修饰的特异性抗体来富集目标蛋白,之后再用western bl...
蛋白质组(Proteome)的概念指由一个基因组(genome),或一个细胞、组织表达的所有蛋白质(Protein).蛋白质组的概念与基因组的概念有许多差别,它随着组织、甚至环境状态的不同而改变.在转录时,一个基因可以多种mRNA形式剪接,并且,同一蛋白可能以...
乙酰化修饰蛋白质组学分析:乙酰化修饰蛋白质组学分析是指从蛋白质组学的水平分析蛋白质乙酰化修饰,包括乙酰化蛋白质的鉴定和定量。提供基于质谱的乙酰化蛋白组研究服务。蛋白质乙酰化包括组蛋白乙酰化和非组蛋白乙酰化。组蛋白乙酰化主要是赖氨酸乙酰化,已在基因转录调控作用方...
蛋白质-蛋白质相互作用是蛋白质发挥功能的主要机制之一,在DNA损伤修复,自噬和代谢等过程中都扮演着非常重要的角色,蛋白相互作用异常便会导致疾病的发生.在蛋白质的赖氨酸,丝氨酸和苏氨酸等氨基酸残基上,可发生甲基化,乙酰化,磷酸化和泛素化等200多种翻译后修饰,这...
翻译后修饰蛋白组学分析:蛋白质组学的研究的工作不只聚焦于细胞不同生长时期或是疾病条件下的蛋白质表达水平变化,许多至关重要的生命进程不只由蛋白质相对丰度控制,更重要的是被时空特异分布的、可逆的翻译后修饰所调控,因而揭示翻译后修饰发生规律是解析蛋白质复杂多样的生物...
转录组学应用于胃肠瘤转移机制研究:circRNA是一种非编码RNA,可以多种方式参与生物学功能,如细胞增殖、细胞周期、侵袭和转移等。近年来研究发现,环状RNA可以通过海绵吸附微小RNA和RNA结合蛋白参与转录后调控,从而影响瘤耐药过程中的DNA修复、凋亡、增殖...
单细胞转录组关键步骤:单细胞的分离和捕获:温和分离,稀有细胞。转录本的捕获和扩增:RNA测序需要0.1-1.0ugtotalRNA,捕获效率10%(5-**NA测序需要1ngDNA,极限稀释加移液分离单细胞;显微操作分选单细胞;流式分选带有表面Mark...
代谢组学概念:基因与蛋白质的表达紧密相连,而代谢物则更多地反映了细胞所处的环境,这又与细胞的营养状态,药物和环境污染物的作用,以及其它外界因素的影响密切相关。因此有人认为,“基因组学和蛋白质组学告诉你什么可能会发生,而代谢组学则告诉你什么确实发生了。”代谢组学...
蛋白组学研究怎么做?PRM:平行反应监测(ParallelReactionMonitoring)是一种基于高分辨、高精度质谱的离子监视技术,能够对目标蛋白质、目标肽段(如发生翻译后修饰的肽段)进行选择性检测,从而实现对目标蛋白质/肽段进行一定定量,因此也被称之...
代谢组学介绍:通过液质联用(LC-MS)方法检测生物体受外界刺激前后体内大多数小分子代谢物的动态变化,重点寻找在实验组和对照组中有明显变化的代谢物,进而研究这些代谢物与生理病理变化的相关关系,其研究对象大多是分子量1500Da以内的小分子物质。技术优势:较高的...
蛋白质组学发展趋势:技术发展方面:蛋白质组学的研究方法将出现多种技术并存,各有优势和的特点,而难以象基因组研究一样形成比较一致的方法。除了发展新方法外,更强调各种方法间的整合和互补,以适应不同蛋白质的不同特征。另外,蛋白质组学与其它学科的交叉也将日益明显和重要...
蛋白质翻译后修饰组学:蛋白质翻译后修饰(Post-translational modification, PTM)是指对翻译后的蛋白质进行共价加工的过程。它通过在一个或多个氨基酸残基加上修饰基团,可以改变蛋白质的物理、化学性质,进而影响蛋白质的空间构象和活性状...
转录组学应用于胃肠瘤转移机制研究:circRNA是一种非编码RNA,可以多种方式参与生物学功能,如细胞增殖、细胞周期、侵袭和转移等。近年来研究发现,环状RNA可以通过海绵吸附微小RNA和RNA结合蛋白参与转录后调控,从而影响瘤耐药过程中的DNA修复、凋亡、增殖...
PRM靶向蛋白组学:PRM技术是一种根据已知实测信息或质谱检测规律的假定信息对样品中的蛋白质进行靶向定量的技术。该技术主要应用仪器为QExactive系列质谱仪,首先以四极杆作为质量过滤器,特异性地选择与预先设定质荷比相同的肽段离子(母离子)通过,随后在高能碰...
代谢组学发展至今,代谢组学技术已经远远超出了标准临床化学技术的范围,能够精确分析数百至数千种代谢物。代谢组学提供了代谢表型的详细表征,并可以在许多水平上进行精密医学研究,包括表征疾病基础的代谢紊乱,发现新的治靶标以及发现可用于诊断疾病或监测药物的活性。比较常见...