靶向代谢组学分析成功的关键因素是准确度、高通量和可靠性。靶向代谢组学鉴定一般采用 GC/MS 系统的选择性离子监测 (SIM),或在三重串联四极杆 LC/MS 系统上用多反应离子监测 (MRM) 进行靶向 MS/MS。SIM 比全扫描图谱采集具有更高的灵敏度,在单四极杆质谱中,这种灵敏度增强的原因是延长了所选择离子的采集时间。因为监测的是一个很小的质量窗口,所以质量色谱图只表示对极为特定质量的检测。在大多数情况下,灵敏度可以提高 10 倍。MRM 是进行质谱定量的选择方法,与 SIM 相比更为灵敏、更加特异。可以产生独特的碎片离子,可对非常复杂基质中的目标化合物进行监测和定量。代谢组学的研究对象与层次有哪些?山东LC-MS/MS非靶向代谢组学质谱分析
代谢组学有哪些特点?(1) 代谢处于系统生物学的末端,更能反映基因与外部环境互作的真实情况,因此,在多数生物表型研究上更加适用。(2) 常规代谢组学只关注内源性化合物,也有使用代谢组学技术测定外源性化合物的。内源性化合物的上调和下调指示了与疾病、毒性、基因修饰或环境因子的影响。(3) 高通量定量和定性研究生物小分子化合物。(4) 内源性化合物的结果可以作为疾病的诊断、药物筛选或者其他分型评估等潜在生物标志物。谢组学通过揭示内在和外在因素影响下,生物体的代谢整体的变化轨迹来反映某种生理或病理的一系列发展过程。上海LC-MS/MS非靶向代谢组学分析鉴定代谢组学主要研究的是产物的小分子代谢物(MW<1000)。
代谢组学发展前景:代谢组学是继基因组学、蛋白质组学、转录组学后出现的新兴“组学”,每年发表的代谢组学研究的文章数量都在不断增加。代谢组学的发展很迅速,尽管还没有经典论文出现,但是研究人员相信,与基因组学和蛋白质组学相比,代谢组学将在临床上发挥更大的作用。许多公司通过市场研究发现,健康人并不希望进行基因型分析,所以,对于这些人群来说,基因组学研究在临床上的应用很有限。而代谢组学与临床化学较为相似,且相对于基因组学来说,提供的个人信息更少,故其在临床上的应用有可能产生一定的影响。
代谢组学细胞样本收集:悬浮细胞:1)连同培养基转移到1.5 mL的进口离心管中。2)低速离心5 min(低于3000 rpm),使细胞沉淀于离心管的底部(1*107个细胞为宜)。3)倒掉培养基(尽量倒干净),用预冷的PBS反复冲洗2 ~ 3次,低速离心5 min,弃上清。4)标记离心管,将离心管的尖的一端插入液氮中,淬灭细胞沉淀1 min,-80 ℃冻存,干冰寄送。注意事项:1. 培养基倾倒时尽量倒干净,可使用滤纸将残留培养液吸净;2. 甲醇/水请使用色谱纯及以上规格;3. 液氮淬灭细胞时,请小心避免离心管破碎导致样本受损;4. 建议细胞样本在进行培养时多准备样本,以备后续使用。代谢组学主要研究的是各种代谢路径的底物。
代谢组学的研究对象与层次有哪些?一般来说,代谢组学关注的对象是分子量在1000以下的小分子化合物。根据研究的对象和目的不同,科学家将生物体系的代谢产物分析分为4个层次:代谢物靶标分析:某一个或几个特定组分的定性和定量分析,如某一类结构、性质相关的化合物(氨基酸、有机酸、顺二醇类)或者某一代谢途径的所有中间产物或多条代谢途径的标志性组分。代谢物指纹分析:同时对多个代谢物进行分析,不分离鉴定具体单一组分。代谢轮廓分析:限定条件下对生物体内特定组织内的代谢产物的快速定性和半定量分析。代谢组分析:对生物体或体内某一特定组织所包含的所有代谢物的定量分析,并研究该代谢物组在外界干预或病理生理条件下的动态变化规律。代谢组学的研究处于生物信息流的中游。武汉非靶向代谢组学主要技术
代谢组学的代谢产物是基因表达的产物。山东LC-MS/MS非靶向代谢组学质谱分析
代谢组学疾病诊断应用: 代谢组学研究人员已经对此进行了研究。新生儿是否缺失酶基因,可以在出生时就检测出来??杉觳獬霭ㄉ婕昂铣赏揪吨械幕境煞郑ㄈ绨被幔┑拿?。酶缺失的结果就是相应的代谢产物过少或过多。尿症(PKU)是一种常见的婴儿疾病。这种疾病是由于缺失将苯丙氨酸水解成酪氨酸所必须的苯丙氨酸水解酶基因,导致血液中苯丙氨酸累积造成的。若是不能及时检测出这种天生的代谢缺乏,在婴儿出生后九个月内,就会引起无法挽救的大脑损伤。这种疾病通过简单的血样和尿素化验就可以确诊。而血样和尿素化验以后也将成为代谢指纹研究方法的一部分。像尿症那样的疾病,研究人员正试图从疾病的生物化学基础着手,而不是只有检测生物标记物。他们希望通过代谢组学,可以找到更好的方法去治这些疾病。山东LC-MS/MS非靶向代谢组学质谱分析
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