PRM靶向蛋白质组学:是一种基于Orbitrap为表示的高分辨、高精度质谱的离子监视技术,首先利用四级杆质量分析器的选择能力,用Q1选择目标肽段的母离子,随后在collisioncell中对母离子进行碎裂,然后利用Orbitrap分析器在二级质谱中检测所选择的母离子窗口内的所有碎片信息。这样能够对目标蛋白质、目标肽段(如发生翻译后修饰的肽段)进行选择性检测,即可对目标蛋白质/肽段进行相对(一定)定量。从而实现对复杂样本中的目标蛋白质/肽段进行准确地特异性分析。蛋白质组与基因组相对应,也是一个整体的概念。广州蛋白质组学项目
PRM靶向蛋白组学:PRM技术是一种根据已知实测信息或质谱检测规律的假定信息对样品中的蛋白质进行靶向定量的技术。该技术主要应用仪器为QExactive系列质谱仪,首先以四极杆作为质量过滤器,特异性地选择与预先设定质荷比相同的肽段离子(母离子)通过,随后在高能碰撞池中碎裂母离子,之后通过Orbitrap分析碎片离子(子离子)得到肽段的二级质谱信息。四极杆的高选择性离子过滤与Orbitrap高分辨率测量技术的结合使得PRM技术有很高的特异性,并且有效的降低了背景噪音,去除了干扰离子,提高了灵敏度。在确保数据质量的前提下,为了在一次分析中检测更多的蛋白质,可用预置PRM(ScheduledPRM,sPRM)的方法,这种方法需要知道每个肽段的保留时间信息,使得每个肽段只在其洗脱时间窗口内执行PRM检测,很大程度上提高了检测效率,可同时检测上百种蛋白质。PRM技术是目前应用较普遍的质谱蛋白质靶向定量技术。山东常规蛋白质组学应用蛋白质组学在应用中,更多地用于提供高通量蛋白质定性定量信息。
蛋白质组学概念:蛋白质组学(英语:proteomics,又译作蛋白质体学),是以蛋白质组为研究对象,研究细胞、组织或生物体蛋白质组成及其变化规律的科学。蛋白质组(Proteome)一词,源于蛋白质(protein)与基因组(genome)两个词的组合,意指“一种基因组所表达的全套蛋白质”,即包括一种细胞乃至一种生物所表达的全部蛋白质。蛋白质组学本质上指的是在大规模水平上研究蛋白质的特征,包括蛋白质的表达水平,翻译后的修饰,蛋白与蛋白相互作用等,由此获得蛋白质水平上的关于疾病发生,细胞代谢等过程的整体而全方面的认识。
蛋白质组学,指对某一基因组所表达的所有蛋白质及其特征进行大规模、系统化地研究,以期望在蛋白质水平上解释控制复杂的生命活动的分子网络。研究的内容主要包括:组成蛋白质一级结构氨基酸的序列特征、蛋白质的丰度、蛋白质活性、蛋白质的修饰、亚细胞定位和三维结构、蛋白质之间的相互作用以及对蛋白质的高阶复合物结构。质谱技术的发展为这些研究提供了有力的技术支撑,使得许多有实际应用的蛋白质组功能研究成为可能,包括翻译后修饰的整体分析,蛋白质相互作用网络的重建和模式生物蛋白表达谱的定量研究;在临床医学和转化医学研究中也越来越多地应用到蛋白质组学技术。蛋白质组研究技术涉及到各种重要的生物学现象,如信号转导、细胞分化、蛋白质折叠等等。
蛋白质组学技术:等电聚焦:等电聚焦(isoelectricfocusing,IEF)是一种利用有pH梯度的介质分离等电点不同的蛋白质的电泳技术。等电聚焦凝胶电泳依据蛋白质分子的静电荷或等电点进行分离,等电聚焦中,蛋白质分子在含有载体两性电解质形成的一个连续而稳定的线性pH梯度中电泳。载体两性电解质是脂肪族多氨基多羧酸,在电场中形成正极为酸性,负极为碱性的连续的pH梯度。蛋白质分子在偏离其等电点的pH条件下带有电荷,因此可以在电场中移动;当蛋白质迁移至其等电点位置时,其静电荷数为零,在电场中不再移动,据此将蛋白质分离。蛋白质组学在生物学领域的研究中的应用是怎样的?广州蛋白质组学项目
蛋白质组的研究能为众多种疾病机理的阐明及攻克提供理论根据和解决途径。广州蛋白质组学项目
非标定量法(Label-free)是通过比较质谱分析次数或质谱峰强度,分析不同来源样品蛋白的数量变化,认为肽段在质谱中被捕获检测的频率与其在混合物中的丰度成正相关,因此蛋白质被质谱检测的计数反映了蛋白质的丰度,通过适当的数学公式可以将质谱检测计数与蛋白质的量联系起来,从而对蛋白质进行定量。按照其原理主要分为两种,第1种spectrumcounts类的非标记方法,发展比较早,已经形成多种定量算法,但是主要的原理都是以MS2的鉴定结果为定量基础,各种方法的差别在于后期算法在大规模数据上的修正。第二种非标记定量的原理是以MS1为基础,计算每个肽段的信号强度在LC-MS上的积分。广州蛋白质组学项目
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