代谢组学需要多少的生物学重复?生物学重复指的是相同处理的相同类型的生物样本的数量(如相同剂量给药后2小时的小鼠采集并且相同储存条件和处理方法血清样本)。相较于基因和蛋白,代谢物处于生命活动的下游,收到环境和遗传背景等因素影响较大,生物学重复少可能会放大组内差异对于整体差异的影响,进而影响结果(如准确和足够多的找出生物标志物)。因此根据不同的生物类型,需要不同的生物学重复来增加数据的可靠性和说服力。代谢组学的研究方法与蛋白质组学的方法类似。代谢组学是要涉及研究每一个代谢组分的共性、特性和规律。LC-MS/MS非靶向代谢组学定量分析
什么是非靶向代谢组学、靶向代谢组学?(1) 非靶向代谢组学(Untargeted metabolomics)即非目标代谢组学或发现代谢组学,无偏向性地对所有小分子代谢物(一般相对分子量小于1000)同时进行检测分析的代谢组学。(2) 靶向代谢组学(Trgeted metabolomics)则为目标性代谢组学,着重对于设定好的目标代谢物进行定性、量检测分析和研究。相比于其他组学,代谢组学有哪些特殊的优势?系统生物学有基因组学、转录组学、蛋白组学和代谢组学。代谢组学作为系统生物学的一个重要的分支,与其他组学相比有着其特有的优势,主要体现在以下几点:(1) 基因与蛋白质表达的微小变化会在相应代谢物水平上得到放大,更容易被检测。(2) 代谢物的种类要远小于基因和蛋白的数目。(3) 可与生物表型变化建立直接相关性。上海农学靶向代谢组学主要技术代谢组学是继基因组学、蛋白质组学、转录组学后出现的新兴“组学”。
代谢组学在系统生物学中有什么作用?它的地位如何?代谢物作为生物体表型的基础能够帮助我们更直观有效地了解生命现象揭示生命本质。代谢组学本质上是指从整体上研究生物体的代谢物,是对某一生物、组织或细胞中的所有低分子量代谢产物进行定性与定量分析的一门科学。代谢组学以指标分析为基础,高通量检测为手段,通过研究生物体内代谢物的种类与数量及其变化规律来阐述机体在正常生命状态及环境变化后的代谢过程。代谢组是系统生物学的分支学科之一。其研究内容主要包括对代谢物进行定性或定量分析,不同基因型的生物体进行代谢组学表型研究,不同生长环境及加物理、化学或生物性刺激后个体代谢产物的应答,进行代谢途径或代谢网络解析与转基因评价。
代谢组学样本收集植物组织:果实、种子:1)对于含水量高、体积较大的果实(番茄、西瓜、苹果等)需要先将样品分成“均匀”的小块(≈ 200 mg/样本)分装至2 mL离心管中,标号后迅速放入液氮中冷冻处理至少15 min。2)对于细小的颗粒种子(拟南芥种子、谷物种子等),可以先将同一组的植株种子混匀后再分装(≈ 200 mg/样本)至离心管中,标号后迅速放入液氮中冷冻处理至少15 min。3)对于要求对整个果实进行提取的(整粒葡萄等),需要把果实装在50 mL离心管/自封袋中,标号后迅速放入液氮中冷冻处理至少15min,-80 ℃冻存,干冰寄送。在食品安全领域,利用代谢组学工具发现农兽药等在动植物体内的相关生物标志物也是一个热点领域。
代谢组学如何控制临床样本的质量?对于临床的样本建议每组比较低的25个生物学重复,达到30例以上比较好。因为临床样本受外界环境和遗传背景影响较大,需要很多生物学重复来消除这些外在影响。此外,在样本收集过程中,应保持收养的时间段和操作程序尽可能一致。代谢组学样本收集取样基本原则:表示性和一致性:验组与对照组样本在取材部位、时间处理等方面尽可能保持一致,从而保证实验的可信度;迅速性:操作过程迅速,很大限度缩短样本采集到实验的时间;低温原则:所有样本离体后,分离步骤应在4℃或冰上进行,分离好的样本立即存于-80℃,以免样本产生进一步代谢活动。代谢组学的发展很迅速。广东非靶向代谢组学分析方法
代谢组学 (metabolomics)的出现是生命科学研究的必然。LC-MS/MS非靶向代谢组学定量分析
代谢组学比较常用到的数据分析方法:代谢组学分析数据用于统计分析时,数据集通常为一个N × K的矩阵(X矩阵),N表示N个样本数,每一行表示一个样品, K表示K个变量,每一列表示一个变量,在代谢组学中变量通常是指代谢物含量。单变量分析方法只分别分析单个变量,不考虑多个变量的相互作用与内在联系。具有简单性、易应用性和可解释性。但是无法基于整体数据对所测样品的优劣、差异进行综合评价和分析。差异倍数变化大小(Fold Change,FC)表示实验组与对照组的含量比值,可以快速考察各个代谢物在不同组别之间的含量变化大小。LC-MS/MS非靶向代谢组学定量分析
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