蛋白磷酸化修饰过程:蛋白磷酸化修饰这一过程是通过蛋白激酶催化,将磷酸基团从ATP转移到多肽底物的丝氨酸、苏氨酸,或酪氨酸残基上。并且磷酸化修饰的过程是可逆的,去磷酸化反应由蛋白磷酸酶催化完成。蛋白磷酸化检测方法:Western Blot检测方法:Western Blot是检测蛋白磷酸化水平的常用方法,主要过程为先利用SDS-PAGE分离蛋白质,随后将蛋白质转移到PVDF膜上,然后使用特异性识别磷酸化蛋白的抗体来鉴定目标蛋白的磷酸化水平。只有被磷酸化修饰的蛋白才会在相应分子质量的地方显现特异性蛋白条带。蛋白质磷酸化修饰组学具有全方面性。河南乙酰化修饰蛋白质组学鉴定翻译后修饰蛋白组学分析:在蛋白翻...
蛋白质翻译后修饰分析策略:早期蛋白质组研究的大部分工作集中在细胞生长的不同时期,或疾病或有丝分裂原刺激后的蛋白质表达水平的变化。然而,许多生命过程不只受蛋白质的相对丰度控制,还受时空分布可逆的翻译后修饰控制。因此,揭示翻译后修饰的规律是了解蛋白质复杂性和多样的生物学功能的前提。蛋白质的翻译后修饰是一个复杂的过程。目前,发现的比较常见的修饰类型是糖基化、泛素化和磷酸化。样品中翻译后修饰蛋白质含量低、动态范围广给相关研究带来了很大的挑战。基于翻译后修饰蛋白的异质性和相对丰度低的特点,主要利用凝胶、生物质谱和生物信息学工具对其进行研究。用于PTM分析的质谱方法类似于用于“常规”蛋白质鉴定的方法,包括...
蛋白质乙酰化修饰组学定量分析:1. SILAC细胞标记,组织/细胞破碎,提取、提纯目的蛋白质(基于SILAC的乙酰化修饰组学定量)。2. 使用胰蛋白酶将目的蛋白酶解成多肽片段。3. 对多肽片段进行iTRAQ标记(基于iTRAQ的乙酰化修饰组学定量)。4. 使用高效特异性乙酰化抗体对乙酰化修饰肽段进行免疫富集。5. 使用LC-MS/MS对富集的乙酰化肽段进行序列分析。6. 数据分析,比对不同样本中蛋白乙酰化修饰水平差异,并对产生变化的生物学意义进行解释。泛素化修饰是一种重要的翻译后修饰。浙江磷酸化修饰蛋白质组学有哪些类型翻译后修饰蛋白组学分析:在蛋白翻译后修饰方式的鉴定过程中,蛋白会首先被酶切成...
蛋白质磷酸化修饰鉴定方法: Mn2+-Phos-tag SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳:Mn2+-Phos-tag SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳通过连接在丙烯酰胺分子上的双核金属(如Mn2+)配合物对磷酸基团的亲和,造成磷酸化蛋白迁移的滞留,再将电泳结果转移到PVDF膜上,用相应蛋白的抗体识别,根据迁移滞留检测蛋白磷酸化。技术优势特点:1、无放射危害。2、鉴定不受限于特异性识别蛋白质磷酸化的抗体。3、适用于大规模磷酸化蛋白分析。4、与质谱鉴定兼容,进行更为精细的分析鉴定。蛋白质磷酸化修饰组学具有有效性。湖北蛋白质琥珀酰化修饰组学费用蛋白翻译后修饰检测:由于PTMs在基础生物学以及疾病发病机理中的重要...
质谱分析蛋白翻译后修饰原理:相较于没有发生翻译后修饰的蛋白,翻译后修饰蛋白会在特定肽段序列有分子量的增加。在蛋白翻译后修饰方式的质谱分析过程中,蛋白会首先被酶切成肽段,然后进入质谱进行分析;通过质谱分析,得到的是一系列肽段的相对分子质量信息。对于某一个特定的肽段而言,在没有发生任何翻译后修饰的情况下其序列信息和分子量是确定的,当它发生了某种翻译后修饰之后,例如磷酸化修饰,因为磷酸根的分子量也是确定的,所以在质谱检测过程中如果发现部分肽段的分子量刚好增加了一个磷酸根的分子量,则可以假设这个肽段发生了磷酸化修饰,再通过二级或多级质谱的谱图进行二次确认即可实现翻译后修饰类型鉴定及修饰位点分析等。在蛋...
蛋白质学组翻译后修饰的研究策略:自中而下:自中而下的分析方法是自下而上分析方法的一种替代方法,分析组蛋白时其原理类似于自下而上分析策略。在使用这种分析方法时,通常需要将被检测蛋白质消化成3-9kDa范围内的肽段,因此也无法保证检测到的肽段的完整性。但是,由于仪器的进步和保留了组蛋白尾部的组合修饰,自中而下分析法正逐渐受到欢迎。自中而下更接近于自下而上法的灵敏度。自上而下:自上而下技术可以直接对完整的蛋白质进行测序,包括翻译后修饰的蛋白质和其他大的蛋白质片段,而不只是肽段。这可以比较大程度地保留与PTMs相关的信息,使其适用于组蛋白的全方面表征和分析。自上而下技术对蛋白质的有效分辨率已达到229...
蛋白质乙酰化修饰组学定量分析:1. SILAC细胞标记,组织/细胞破碎,提取、提纯目的蛋白质(基于SILAC的乙酰化修饰组学定量)。2. 使用胰蛋白酶将目的蛋白酶解成多肽片段。3. 对多肽片段进行iTRAQ标记(基于iTRAQ的乙酰化修饰组学定量)。4. 使用高效特异性乙酰化抗体对乙酰化修饰肽段进行免疫富集。5. 使用LC-MS/MS对富集的乙酰化肽段进行序列分析。6. 数据分析,比对不同样本中蛋白乙酰化修饰水平差异,并对产生变化的生物学意义进行解释。蛋白质翻译后修饰的作用主要是改变蛋白质的定位。浙江乙酰化修饰蛋白质组学技术服务翻译后修饰蛋白组学分析:蛋白质组学的研究的工作不只聚焦于细胞不同生...
翻译后修饰蛋白组学分析:在蛋白翻译后修饰方式的鉴定过程中,蛋白会首先被酶切成肽段,然后进入质谱进行分析。通过质谱分析,得到的是一系列肽段的分子质量信息。对于某一个特定肽段而言,在没有发生任何翻译后修饰的情况下,其序列信息和分子量是确定的。当它发生了某种翻译后修饰之后,例如磷酸化修饰,由于序列信息和分子量是确定的,磷酸根的分子量也是确定的。在质谱检测过程中发现其中的部分肽段的分子量刚好增加了一个磷酸根的分子量,假设这个肽段就发生了磷酸化修饰,再通过二级质谱图进行二次确认。蛋白质磷酸化修饰组学具有探索性。浙江糖基化修饰蛋白质组学费用蛋白质磷酸化修饰组学:蛋白质的磷酸化修饰是生物体内重要的共价修饰方...
蛋白质磷酸化修饰鉴定方法:质谱鉴定法:在质谱分析中,先使试样中各组分电离生成不同荷质比的离子,然后经加速电场的作用,生成离子束,进入质量分析器。在质量分析器中,在磁场的作用下,质荷比相同的离子会被聚焦到同一点上,不同质荷比的离子聚焦于不同点上,因此获得区分不同质荷比离子的质谱图。与未经修饰的肽段相比,磷酸基团修饰的肽段在相对分子质量上就会增加79.983,由此在质谱图中能够与未修饰肽段进行区分。固相金属离子亲和色谱利用的是磷酸基团与固相化的金属离子有高亲和力,可有效吸附磷酸化基团,从而达到富集磷酸化肽段的效果。鳌合底物上的金属离子通常是Fe3+或Ga3+,可以选择性地与磷酸化肽中的磷酸部分相结...
蛋白质磷酸化修饰组学:蛋白质的磷酸化修饰是生物体内重要的共价修饰方式之一。磷酸化修饰本身所具有的简单、灵活、可逆的特性,以及磷酸基团的供体ATP的易得性,使得磷酸化修饰被真核细胞所选择接受成为一种比较普遍的调控手段。蛋白质的磷酸化和去磷酸化这一可逆过程,几乎调节着包括细胞的增殖、发育、分化、细胞骨架调控、细胞凋亡、神经活动、肌肉收缩、新陈代谢发生等生命活动的所有过程,并且可逆的蛋白质磷酸化是目前所知道的比较主要的信号转导方式。目前已经知道有许多人类疾病是由于异常的磷酸化修饰所引起,而有些磷酸化修饰却是某种疾病所导致的后果。常见的蛋白质翻译后修饰包括泛素化。湖北蛋白质亚硝基化修饰组学类型蛋白质翻...
什么是蛋白质的翻译后修饰?蛋白质的翻译后修饰(post-translational-modification-analysis.html)是指蛋白质在翻译后的化学修饰。对于大部分的蛋白质来说,这是蛋白质生物合成的较后步骤。PTM是细胞信号传导中的重要组成部分。通过向修饰基团添加一个或多个氨基酸残基或通过蛋白质水解切割该基团来改变蛋白质的性质,是蛋白质生物学功能表达的重要步骤。生物蛋白质的翻译后修饰极大地增加了蛋白质结构的类型和功能。这个过程调节细胞周期和蛋白质转录,并影响表观遗传学。常见的蛋白质翻译后修饰包括糖基化。四川乙酰化修饰蛋白质组学方法蛋白磷酸化修饰过程:蛋白磷酸化修饰这一过程是通过蛋...
蛋白质磷酸化修饰组学:磷酸化蛋白质是由蛋白激酶将ATP或GTP分子上的磷酸基团转移到底物蛋白特定的氨基酸侧链上形成的。蛋白质磷酸化是一种可逆的蛋白质翻译后修饰。在哺乳动物的细胞生命周期中,至少有三分之一的蛋白质发生磷酸化修饰。磷酸化修饰参与许多信号转导途径和细胞代谢过程,且许多已知的疾病也与蛋白质的异常磷酸化有关。因此,对磷酸化蛋白质组进行定量研究,寻找差异表达的磷酸化蛋白质,有助于发现疾病的生物标志物和寻找新的具有诊疗潜力的药物靶标。蛋白磷酸化修饰过程是通过蛋白激酶催化,将磷酸基团从ATP转移到多肽底物的丝氨酸、或酪氨酸残基上。深圳泛素化修饰蛋白质组学鉴定蛋白质翻译后修饰组学:翻译后修饰自下...
蛋白翻译后修饰组学技术在准确医学中的应用:尽管目前大数据的获得会采用基因组学和转录组学,但是关键的发现还是依赖蛋白质组数据而得到的。近来越来越多的研究表明蛋白组学驱动的准确的医学具有极大的实用性和普适性,蛋白组学的研究更加速了临床转化的进程。蛋白翻译后修饰(post-ranslational modification, PTM)赋予了蛋白种类的丰富性及蛋白功能的多样化,研究蛋白翻译后修饰不只可以确定蛋白修饰(磷酸化、泛素化、酰化、甲基化、SUMO化等)或蛋白酶裂解的新位点,还可以发现生物标记物及探索药物/化学调节物的作用机制。蛋白质磷酸化修饰鉴定方法有免疫印迹技术。上海乙酰化修饰蛋白质组学质谱...
蛋白翻译后修饰组学技术在准确医学中的应用:尽管目前大数据的获得会采用基因组学和转录组学,但是关键的发现还是依赖蛋白质组数据而得到的。近来越来越多的研究表明蛋白组学驱动的准确的医学具有极大的实用性和普适性,蛋白组学的研究更加速了临床转化的进程。蛋白翻译后修饰(post-ranslational modification, PTM)赋予了蛋白种类的丰富性及蛋白功能的多样化,研究蛋白翻译后修饰不只可以确定蛋白修饰(磷酸化、泛素化、酰化、甲基化、SUMO化等)或蛋白酶裂解的新位点,还可以发现生物标记物及探索药物/化学调节物的作用机制。通过蛋白质翻译后修饰也进一步增加了细胞通路机制和生命活动的多样性和复...
蛋白质磷酸化修饰类型:根据磷酸氨基酸残基的不同,可将磷酸化蛋白质分为4类,即O-磷酸盐蛋白质、N-磷酸盐蛋白质、酰基磷酸盐蛋白质和S-磷酸盐蛋白质。1、O-磷酸盐蛋白质通过羟氨基酸(如丝氨酸、苏氨酸或酪氨酸)的磷酸化形成。2、 N-磷酸盐蛋白质通过精氨酸、赖氨酸或组氨酸的磷酸化形成。3、 酰基磷酸盐蛋白质通过天冬氨酸或谷氨酸的磷酸化形成。4、 S-磷酸盐蛋白质通过半胱氨酸磷酸化形成。蛋白质磷酸化修饰鉴定方法:免疫印迹技术是在凝胶电泳和固相免疫测定技术基础上发展起来的、根据特定抗原-抗体的特异性反应来检测复杂样品中的某种蛋白质的免疫生化分析方法。蛋白质的翻译后修饰通过可逆的共价键将小分子或蛋白质...
蛋白质乙酰化修饰组学技术:乙酰化修饰是体内保守的可逆转的蛋白修饰,对细胞核内转录调控因子的刺激有着重要的作用。此外,还存在的非组蛋白乙酰化修饰参与了代谢通路及代谢酶活性的调节。采用肽段预分离降低高丰度组蛋白对蛋白乙酰化鉴定的影响,再结合免疫共沉淀通过抗体富集乙酰化的肽段,从而实现乙酰化的鉴定及定量。样品要求:1、SDS-PAGE条带:5个以上可见考染条带。2、溶液(目标蛋白质):目标蛋白总量>50μg,目标蛋白浓度>80%。3、溶液(大规模混合蛋白质):蛋白总量>1mg,蛋白浓度>1μg/μl。蛋白质磷酸化修饰组学具有可靠性。山东亚硝基化修饰蛋白质组学价格蛋白质乙酰化修饰定义:蛋白质在细胞中经...
蛋白磷酸化检测方法:一、Western Blot检测方法优势:1. WB方法简便,多数实验室具备Western Blot设备条件。2. 许多磷酸化抗体十分灵敏,能够检测低至10ug的蛋白样品。3. 对于丰度低的蛋白,可以先通过IP使用目标蛋白的抗体对目标蛋白进行富集,再进行WB检测被磷酸化的蛋白,检测效率可以提高几倍甚至几十倍。二、质谱检测方法:Western Blot的方法虽然简便,但是对于大规模分析复杂的生物样品的磷酸化水平就不再适用了。而质谱却能很好的解决这一问题。依靠高准确度质谱仪,如今快速准确分析细胞中高丰度蛋白的磷酸化修饰已是非常简单的事。具体的检测方法为先通过SDS-PAGE胶,...
蛋白质磷酸化修饰鉴定方法:质谱鉴定法:在质谱分析中,先使试样中各组分电离生成不同荷质比的离子,然后经加速电场的作用,生成离子束,进入质量分析器。在质量分析器中,在磁场的作用下,质荷比相同的离子会被聚焦到同一点上,不同质荷比的离子聚焦于不同点上,因此获得区分不同质荷比离子的质谱图。与未经修饰的肽段相比,磷酸基团修饰的肽段在相对分子质量上就会增加79.983,由此在质谱图中能够与未修饰肽段进行区分。固相金属离子亲和色谱利用的是磷酸基团与固相化的金属离子有高亲和力,可有效吸附磷酸化基团,从而达到富集磷酸化肽段的效果。鳌合底物上的金属离子通常是Fe3+或Ga3+,可以选择性地与磷酸化肽中的磷酸部分相结...
蛋白质-蛋白质相互作用是蛋白质发挥功能的主要机制之一,在DNA损伤修复,自噬和代谢等过程中都扮演着非常重要的角色,蛋白相互作用异常便会导致疾病的发生.在蛋白质的赖氨酸,丝氨酸和苏氨酸等氨基酸残基上,可发生甲基化,乙酰化,磷酸化和泛素化等200多种翻译后修饰,这些修饰通常能改变蛋白质的电性,疏水性和空间结构等属性,为与之结合的蛋白提供结合的锚定或产生位阻效应,像一把开关在时空上精确调控蛋白质-蛋白质相互作用的发生以及动态变化.结构研究表明,蛋白质之间的相互作用通常由临近的几个氨基酸残基直接结合,替换该区域的氨基酸残基,通常能破坏结合,使其失去部分功能或酶活性,可以针对性地开发和设计抑制剂,用于疾...
蛋白质翻译后修饰有什么生物学意义?可以使蛋白质具有生物活性,可以发挥相应的功能。翻译是蛋白质生物合成(基因表达中的一部分,基因表达还包括转录)过程中的第二步(转录为第1步),翻译是根据遗传密码的中心法则,将成熟的信使RNA分子(由DNA通过转录而生成)中“碱基的排列顺序”(核苷酸序列)解码,并生成对应的特定氨基酸序列的过程。但也有许多转录生成的RNA,如转运RNA(tRNA)、核糖体RNA(rRNA)和小核RNA(snRNA)等并不被翻译为氨基酸序列。蛋白质磷酸化修饰怎么定义?北京蛋白质棕榈酰化修饰组学有哪些类型蛋白质乙酰化修饰鉴定流程:1. 组织/细胞破碎,提取、提纯目的蛋白质。2. 使用胰...
蛋白质磷酸化修饰组学技术:蛋白质的磷酸化修饰是生物体内重要的共价修饰方式之一。磷酸化修饰本身所具有的简单、灵活、可逆的特性,以及磷酸基团的供体ATP的易得性,使得磷酸化修饰被真核细胞所选择接受成为一种普遍的调控手段。蛋白质的磷酸化和去磷酸化这一可逆过程,几乎调节着包括细胞的增殖、发育、分化、细胞骨架调控、细胞凋亡、神经活动、肌肉收缩、新陈代谢发生等生命活动的过程,并且可逆的蛋白质磷酸化是目前所知道的主要的信号转导方式。目前已经知道有许多人类疾病是由于异常的磷酸化修饰所引起,而有些磷酸化修饰却是某种疾病所导致的后果。蛋白质翻译后修饰组学磷酸化修饰具有可逆的特性。武汉蛋白质丙二酰化修饰组学鉴定蛋白...
蛋白质乙酰化修饰组学技术:乙酰化修饰是体内高度保守的可逆转的蛋白修饰,对细胞核内转录调控因子的刺激有着非常重要的作用。此外,还存在大量的非组蛋白乙酰化修饰参与了代谢通路及代谢酶活性的调节。乙酰化修饰组学技术服务采用肽段预分离降低高丰度组蛋白对蛋白乙酰化鉴定的影响,再结合免疫共沉淀通过高效的抗体富集乙酰化的肽段,从而实现大规模乙酰化的鉴定及定量。蛋白质泛素化修饰组学技术:泛素化修饰是一种重要的翻译后修饰。泛素-蛋白酶体系统介导了真核生物体内80%~85%的蛋白质降解。此外,泛素化修饰还可以直接影响蛋白质的活性和定位,调控包括细胞周期、细胞凋亡、转录调控、DNA 损伤修复以及免疫应答等在内的多种细...
蛋白质磷酸化修饰类型:根据磷酸氨基酸残基的不同,可将磷酸化蛋白质分为4类,即O-磷酸盐蛋白质、N-磷酸盐蛋白质、酰基磷酸盐蛋白质和S-磷酸盐蛋白质。1、O-磷酸盐蛋白质通过羟氨基酸(如丝氨酸、苏氨酸或酪氨酸)的磷酸化形成。2、 N-磷酸盐蛋白质通过精氨酸、赖氨酸或组氨酸的磷酸化形成。3、 酰基磷酸盐蛋白质通过天冬氨酸或谷氨酸的磷酸化形成。4、 S-磷酸盐蛋白质通过半胱氨酸磷酸化形成。蛋白质磷酸化修饰鉴定方法:免疫印迹技术是在凝胶电泳和固相免疫测定技术基础上发展起来的、根据特定抗原-抗体的特异性反应来检测复杂样品中的某种蛋白质的免疫生化分析方法。通过蛋白质翻译后修饰也进一步增加了细胞通路机制和生...
蛋白质磷酸化修饰鉴定方法: Mn2+-Phos-tag SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳:Mn2+-Phos-tag SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳通过连接在丙烯酰胺分子上的双核金属(如Mn2+)配合物对磷酸基团的亲和,造成磷酸化蛋白迁移的滞留,再将电泳结果转移到PVDF膜上,用相应蛋白的抗体识别,根据迁移滞留检测蛋白磷酸化。技术优势特点:1、无放射危害。2、鉴定不受限于特异性识别蛋白质磷酸化的抗体。3、适用于大规模磷酸化蛋白分析。4、与质谱鉴定兼容,进行更为精细的分析鉴定。蛋白质翻译后修饰有什么生物学意义?河南磷酸化修饰蛋白质组学研究质谱分析蛋白翻译后修饰:相对于蛋白质印迹等技术,质谱技术能更有效的对...
蛋白磷酸化修饰过程:蛋白磷酸化修饰这一过程是通过蛋白激酶催化,将磷酸基团从ATP转移到多肽底物的丝氨酸、苏氨酸,或酪氨酸残基上。并且磷酸化修饰的过程是可逆的,去磷酸化反应由蛋白磷酸酶催化完成。蛋白磷酸化检测方法:Western Blot检测方法:Western Blot是检测蛋白磷酸化水平的常用方法,主要过程为先利用SDS-PAGE分离蛋白质,随后将蛋白质转移到PVDF膜上,然后使用特异性识别磷酸化蛋白的抗体来鉴定目标蛋白的磷酸化水平。只有被磷酸化修饰的蛋白才会在相应分子质量的地方显现特异性蛋白条带。蛋白质翻译后修饰的作用主要是改变蛋白质的定位。湖北蛋白质糖基化修饰组学鉴定蛋白质磷酸化修饰定义...
蛋白质磷酸化修饰组学:蛋白质的磷酸化修饰是生物体内重要的共价修饰方式之一。磷酸化修饰本身所具有的简单、灵活、可逆的特性,以及磷酸基团的供体ATP的易得性,使得磷酸化修饰被真核细胞所选择接受成为一种比较普遍的调控手段。蛋白质的磷酸化和去磷酸化这一可逆过程,几乎调节着包括细胞的增殖、发育、分化、细胞骨架调控、细胞凋亡、神经活动、肌肉收缩、新陈代谢发生等生命活动的所有过程,并且可逆的蛋白质磷酸化是目前所知道的比较主要的信号转导方式。目前已经知道有许多人类疾病是由于异常的磷酸化修饰所引起,而有些磷酸化修饰却是某种疾病所导致的后果。常见的蛋白质翻译后修饰包括泛素化。杭州糖基化修饰蛋白质组学质谱分析蛋白质...
蛋白质学组翻译后修饰的研究策略:目前,有几种分析蛋白质翻译后修饰的策略,包括质谱(MS)、Eastern blotting、放射性标记和Western blotting。放射性标记和Western blotting是比较传统、特异性和相对定量的方法。该过程需要事先知道翻译后修饰类型。局限性包括抗体的特异性和可用性。质谱技术也常被用于翻译后修饰分析,不受修饰类型和相关修饰位点的现有知识的限制。自下而上:自下而上的技术是蛋白质组学研究中使用的质谱策略之一。在根据序列鉴定肽之前,需要使用蛋白酶消化蛋白质。由于该技术不能保证在检测过程中被检测肽的完整性和稳定性,因此无法获得不同蛋白质翻译后修饰之间关系...
蛋白磷酸化检测方法:质谱检测方法优势:1. 准确度高,能够同时检测多个蛋白的多个磷酸化位点。2. 适用于大规模分析蛋白磷酸化水平。3. 不依赖于磷酸化抗体。在实际应用中,Western Blot与质谱分析方法各有各的好,谁也无法完全被另一种方法所替代。所以在选择测定磷酸化修饰的时候还应该根据具体需要来决定。如果研究的蛋白正好有商业化的磷酸化抗体,那么lucky you,你可以选择Western Blot进行快速磷酸化测定研究。但是如果你所研究的蛋白质没有可用的商业化磷酸抗体,或是抗体价效过低,亦或是需要大规模地检测细胞内磷酸化蛋白的水平的话,质谱检测会是更好地选择。蛋白质翻译后修饰可以改变蛋白...
蛋白质-蛋白质相互作用是蛋白质发挥功能的主要机制之一,在DNA损伤修复,自噬和代谢等过程中都扮演着非常重要的角色,蛋白相互作用异常便会导致疾病的发生.在蛋白质的赖氨酸,丝氨酸和苏氨酸等氨基酸残基上,可发生甲基化,乙酰化,磷酸化和泛素化等200多种翻译后修饰,这些修饰通常能改变蛋白质的电性,疏水性和空间结构等属性,为与之结合的蛋白提供结合的锚定或产生位阻效应,像一把开关在时空上精确调控蛋白质-蛋白质相互作用的发生以及动态变化.结构研究表明,蛋白质之间的相互作用通常由临近的几个氨基酸残基直接结合,替换该区域的氨基酸残基,通常能破坏结合,使其失去部分功能或酶活性,可以针对性地开发和设计抑制剂,用于疾...
蛋白磷酸化检测方法:一、Western Blot检测方法优势:1. WB方法简便,多数实验室具备Western Blot设备条件。2. 许多磷酸化抗体十分灵敏,能够检测低至10ug的蛋白样品。3. 对于丰度低的蛋白,可以先通过IP使用目标蛋白的抗体对目标蛋白进行富集,再进行WB检测被磷酸化的蛋白,检测效率可以提高几倍甚至几十倍。二、质谱检测方法:Western Blot的方法虽然简便,但是对于大规模分析复杂的生物样品的磷酸化水平就不再适用了。而质谱却能很好的解决这一问题。依靠高准确度质谱仪,如今快速准确分析细胞中高丰度蛋白的磷酸化修饰已是非常简单的事。具体的检测方法为先通过SDS-PAGE胶,...