而在指数增长期,由于底物充足,聚合酶活性高,反应产物以指数形式积累,且与初始模板量存在定量关系,因此,在该时期对模板起始量进行定量分析准确且重复性比较好。Ct值,是在指数增长期内,荧光信号到达荧光检测阈值时所经历的循环数,其中C循环(Cycle),t阈值(threshold)。每条扩增曲线的Ct值都与初始模板量的对数存在线性关系,初始模板的拷贝数浓度越高,对应的Ct值越小;反之则越大。因此,先根据已知拷贝数浓度标准品的扩增曲线拟合出标准曲线方程,再将样本扩增曲线的Ct值代入标准曲线方程中,便可计算未知样本初始模板的拷贝数浓度,从而实现定量分析。q225 加样孔板侧壁和金属热块能够严密贴合,使液体样品迅速达到设定温度,从而减少实验时间。深圳准确qPCR仪作用
q225 加样孔板侧壁和金属热块能够严密贴合,使液体样品迅速达到设定温度,从而减少实验时间。右上为 q225 在一次40 个循环的常规qPCR 实验内加热块温度变化情况,在整个实验过程中金属块升降温迅速且温度稳定,不受机器本身随实验时间延长而内部背景温度上升的影响。qPCR 反应所需时间很大程度上取决于对反应溶液进行变温所需要的时间,而这一过程又受到加热块升降温速度和液体升降温速度两方面的影响。q225 所使用的热循环系统峰值变温速率可达4°C/s,更重要的是,经过精密设计的加热块能够很大程度地贴合孔板形状,实现高效的热传导,使得在加热块达到预定温度后反应溶液也能在短时间内达到相同温度,反应溶液温度更为均一。q225 出色的热循环系统设计使得40 个循环的常规 qPCR 可以在短短43 分钟内轻松完成,让您的工作效率获得质的提升 。SNP基因分型SNP分型用HRM高分辨熔解曲线方法来做,速度快,效率高。在进行大量SNP标记分型时无需合成荧光探针和荧光引物。可以的节省实验成本。广东相对定量qPCR仪报价PCR反应需要五种关键试剂:PCR模板、DNA聚合酶、引物、脱氧核苷酸三磷酸(dNTPs)、PCR缓冲液。
RealTimePCR是通过检测反应体系中的荧光强度来检测PCR扩增产物的,其荧光检出方法可分为荧光嵌合法和荧光探针法两大种类。荧光嵌合法(SYBRGreenI)的原理荧光嵌合法通常使用SYBRGreenI。SYBRGreenI是一种能够结合于所有dsdna双螺旋小沟区域的具有绿色激发长的染料。它与PCR合成的双链DNA结合,在激发光照射下产生荧光,通过荧光强度的检测,可以实时监测PCR扩增的产物量。荧光嵌合法(SYBRGreenI)的原理荧光嵌合法通常使用SYBRGreenI。SYBRGreenI是一种能够结合于所有dsdna双螺旋小沟区域的具有绿色激发长的染料。它与PCR合成的双链DNA结合,在激发光照射下产生荧光,通过荧光强度的检测,可以实时监测PCR扩增的产物量。
Quantagene q225 PCR仪快速 分秒必争,43 分钟完成40 循环qPCR 实验;准确 精细定量,数据可靠更胜一筹;节省 5-10 ul 反应体积,更少的试剂与样品需求;小巧 轻巧身材,节约空间,更能轻松携带.主要特点:精确定量 以可靠的数据助力您的研究采用拟合算法计算 Ct 值,定量误差不超过±10%。液体冷却循环系统确保孔间温度高度一致,温差不超过 ±0.15°C。光学系统无运动部件,稳定性增加,长期使用无需校准与维护。的仪器间重复性,不同位置、不同反应体积均不影响定量结果。快速高效 用更短的时间获得更多数据40 个循环的常规 qPCR 需43 分钟,较常见qPCR 仪多缩短60% 的时间。在提高速度的同时保持了96 孔的高通量,满足绝大多数实验需求。小巧轻便 节省空间及您的宝贵样品小体积为移动实验和大量部署提供可能。5-10 μl 的推荐反应体积,较常规实验节省80%的试剂用量,更节约您的珍贵样品。PCR的种类根据化学发光原理可以分为:SYBR染料法和TaqMan探针法。
常规PCR中,PCR产物通过凝胶电泳,然后进行成像分析,常规PCR只能通过终点法对扩增产物进行定性分析,而不能进行定量分析;荧光定量PCR中,PCR反应体系中加入了荧光分子,通过荧光信号的变化来反应扩增产物的变化,使PCR产物的实时检测成为可能。相对常规PCR而言,荧光定量PCR的主要优点是准确地确定初始模版拷贝数和较高的检测灵敏度;荧光定量PCR不仅可用于定性,如判断一段序列的有无,也可用于定量,如确定起始模版的拷贝数;常规PCR的定量方法,测定的都是PCR的终产物,而不是起始DNA拷贝数。而从图中可以看出,虽然相同模版在同一台PCR仪上进行96次扩增,终点处检测产物量不恒定,但96次PCR扩增曲线都有一个共同的拐点,即荧光定量PCR中Ct值的重现性,恒定的Ct值为荧光定量PCR的分析提供了理论依据。利用SYBR Green I可以检测PCR反应中获得的全部双链DNA,但是不能区分不同的双链DNA。深圳节省qPCR仪使用说明
实时荧光定量聚合酶链式反应(PCR)指的是在PCR进行的同时,对其过程进行监测的能力。深圳准确qPCR仪作用
原理:在DNA扩增反应中,通过荧光化学物质测定每次PCR循环后产物总量。目的:实现定量而不止是定性分析。通过与内参基因进行对比,对样品中的特定基因进行相对表达量的计算,以实现定量分析。qPCR的检测方法有两种,SYBRGreenl法和TaqMan探针法,下面介绍常用的SYBRGreenl法。原理:在PCR反应体系中,加入过量SYBR荧光染料,使其特异性地掺入DNA双链后,发射荧光信号,而不掺入链中的SYBR染料分子不会发射任何荧光信号,从而保证荧光信号的增加与PCR产物的增加完全同步。试剂及仪器:Hieff®QpcrSYBR®GreenMasterMix试剂(翌圣)和ABI7500Real-TimeSystem实时荧光定量PCR仪进行qRT-PCR扩增。深圳准确qPCR仪作用
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