普通转录组学测序适用于哪些情况？普通转录组测序主要适用于两大类：一是不同的生长阶段或者发育过程；二是不同的环境、药物、病原菌等逆境胁迫处理。转录组学测序必须做生物学重复么？需要几个重复？生物学重复是生物实验所必须的，转录组测序也不例外，至少3次生物学重复。准备生物重复样品时，通过对实验的预先设计和控制，尽可能将与实验处理无关的背景条件控制在同一水平，减少批次效应对结果的影响。转录组学测序可以同时测到mRNA、lncRNA、micRNA以及circRNA么？我们通常所讲的转录组测序只能测到mRNA。但是全转录组测序通过构建两个测序文库（一是小RNA测序文库、二是lncRNA测序文库）是可以测到以上4种RNA的。转录组学分析转录本的结构和表达水平的同时，还能发现未知转录本和稀有转录本。济南宏转录学组服务
单细胞转录组学基本概念：普通转录组的思路也可以应用到单细胞转录组。普通转录组相当于把一群细胞混合到一起去提取RNA，获得的是每个细胞中RNA表达量的平均值。单细胞是把每个细胞单独分出来去提取RNA，然后建库测序，获得是是单个细胞的表达值。在每个细胞里面基因的表达具有随机性，且存在异质性。而且这些细胞群中会存在不同类型的细胞，尤其是当我们对整个组织进行测序时，它们本身就是由不同类型的细胞组成的，而我们用普通转录组来测序，相当于掩盖住了这些不同的细胞类型的差异，展示的是整个组织的平均的状态，所以说单细胞从这个来看跟普通转录组就不同在是用一个细胞测，不是用一堆细胞测。浙江靶向转录组学研究转录组学无需预先设计特异性探针。
RNA-Seq，是基于新一代测序技术的转录组学研究方法：首先提取生物样品的全部转录的RNA并进行mRNA富集，然后反转录为cDNA后进行的新一代高通量测序，在此基础上进行片段的拼接组装，从而可得到一个个的转录本，进而可以形成对该生物样品当前发育状态的基因表达状况的全局了解。不同阶段或部位的生物样品的RNA-Seq转录组进行比较分析，则可以在转录层面得到基因表达水平的变化，针对关键基因则可以进行代谢通路（Pathway）的构建。转录组学即特定细胞在某一功能状态下转录出来的所有RNA的总和，包括mRNA和非编码RNA。
全长转录组学测序：由于在转录组研究中通常所使用的第二代测序技术具有测序读长的限制，因此在进行测序之前，需要先将样本的mRNA打碎为小片段，之后再通过与参考基因组比对或拼接的方式识别转录本，这就会造成一定的错误比例，同时在也很难区分单碱基水平的差异。全长转录组测序的优势：1、全方面鉴定可变剪切；2、发现更多新基因；3、有效改善基因组注释；4、鉴定更多的LncRNA；5、准确定位融合基因。研究思路：由于全长转录组测序是基于第三代测序技术，因而其成本依然较高，如果全部研究项目均基于全长转录组，通常来说很难承担，因此，全长转录组测序一般与普通转录组测序相结合。转录组学是研究细胞表型和功能的一个重要手段。
宏转录学组的概念：宏转录组是特定时期、环境样本、组织样本中所有的微生物的RNA（转录本）的汇合。通过对这些转录本进行大规模高通量测序，可以直接获得环境中可培养和不可培养的微生物转录组信息。这种技术不只具有宏基因组技术的全部优点，可以检测环境中的活性微生物、活性转录本以及活性功能进行研究，还可以比较不同环境下的差异表达基因和差异功能途径，揭示微生物在不同环境压力下的适应机制，探索环境与微生物之间的互作机理。转录组学检测范围广，高于6个数量级的动态检测范围。济南宏转录学组服务
转录组学能够检测未知基因，发现新的转录本。济南宏转录学组服务
单细胞转录组学技术：单细胞转录组目前主要有三种方法：SMART扩增技术、10×genomics技术及Andeplete技术。SMART扩增技术比较关键的技术，就是设计了2个特殊的引物。再配合用MMLV逆转录酶进行逆转录。特殊引物1由中间PolyT序列加上一段通用序列及3’末端两个简并碱基构成，但在PolyT的3’端倒数第二个碱基是A、C、G而非T的简并碱基，而倒数第1个为简并碱基，这样做的好处是让它正好结合在mRNA的3’端连到Poly(A)尾巴的这个连接处，而不会结合到mRNA的别的地方。这样就保证了逆转录的起始位置正好是mRNA的3’端的序列终止位置。MMLV逆转录酶，这个酶有个特点，就是它在转录到mRNA的5’端末端的时侯，会在新合成的cDNA的3’末端，多加出几个C碱基来。济南宏转录学组服务
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