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宏转录学组分析

来源: 发布时间:2022-05-11

什么叫转录组?广义转录组是指生命单元(通常是一种细胞)中所有按基因信息单元转录和加工的RNA分子(包括编码和非编码RNA功能单元),或者是一个特定细胞所有转录本的总和.它的研究对象就是这些RNA与蛋白质分子和它们所组成的基因功能网络以及它们与细胞功能的关系.而狭义转录组是指可直接参与翻译蛋白质的mRNA总和.研究生物细胞中转录组的发生和变化规律的科学就称为转录组学(tran—scriptomics).转录组学的意义1.转录组谱可以提供特定条件下某些基因表达的信息,并据此推断相应未知基因的功能,揭示特定调节基因的作用机制.2.通过基于基因表达谱的分子标签,不仅可以辨别细胞的表型归属,还可以用于疾病的诊断.3.转录组的研究应用于临床的另一个例子是可以将表面上看似相同的病症分为多个亚型,尤其是对原发性恶性瘤子,通过转录组差异表达谱的建立,可以详细描绘出患者的生存期以及对药物的反应等。转录组学差异基因太多,注释信息太杂乱,怎么挑选目标基因?宏转录学组分析

转录组学技术:转录组学(transcriptomics),是一门在整体水平上研究细胞中基因转录的情况及转录调控规律的学科。简而言之,转录组学是从RNA水平研究基因表达的情况。转录组即一个活细胞所能转录出来的所有RNA的总和,是研究细胞表型和功能的一个重要手段。优势:高通量、更精确的数字信号;在单核苷酸水平对任意物种的整体转录活动进行检测;分析转录本的结构和表达水平的同时,还能发现未知转录本和稀有转录本;准确地识别可变剪切和融合基因。应用方向:植物生长机制的发现及干预;炎症发生机制的发现及干预;表达差异的研究;基因点突变及多态性检测。湖北RNA转录组学技术转录组学可以准确地识别可变剪切和融合基因。

全转录组测序为什么需要构建两个文库?全转录组测序需要构建2个测序文库,一个小RNA文库和一个去除核糖体RNA的链特异性文库,然后分别上机测序。小RNA长度较短,一般小于50nt,采用测序策略为50SE。其他三类RNA序列一般大于200,通常在1000以上,可达几万,通过片段化构建150PE测序文库。然后小RNA文库可以获得miRNA序列信息,去核糖体的链特异性文库可以获得mRNA、lncRNA和circRNA的序列信息。转录组学即特定细胞在某一功能状态下转录出来的所有RNA的总和,包括mRNA和非编码RNA。

单细胞转录组关键步骤:单细胞的分离和捕获:温和分离,稀有细胞。转录本的捕获和扩增:RNA测序需要0.1-1.0ugtotalRNA,捕获效率10%(5-**NA测序需要1ngDNA,极限稀释加移液分离单细胞;显微操作分选单细胞;流式分选带有表面Marker的单细胞;激光切割实体组织;微流控技术;磁珠捕获,主要用于CTC。它的一个优点是可以结合流式细胞荧光分?。‵ACS,fluorescentactivatedcellsorting)根据表面Marker分选细胞。因此特别适合分选细胞子集用于测序。它的另一个优点是可以获得细胞形态全览图,提供另外一个维度的信息,可用于鉴定微孔中是否有损伤的细胞或双份细胞,主要缺点是通量低且每个细胞所需的工作量相当大。circRNA主要存在于细胞质或外泌体中,具有组织特异性、疾病特异性、时序特异性及高稳定性等特征。

RNA-Seq转录组学技术优势:相比基因芯片和标记的碱基序列的测序方法,RNA-seq具有一定的优越性。与基因芯片相比,RNA-Seq不只可以在更高的分辨率下用来测量基因的表达水平情况,还可以揭示未知的转录组和拼接亚型,并为选择性拼接亚型提供定量分析。转录组学(Transcriptomics),是一门在真整体水平上研究细胞中基因转录的情况及转录调控规律的学科,从RNA水平研究基因的表达情况。转录组测序是通过二代测序平台快速全方面地获得某一物种特定细胞或组织在某一状态下的几乎所有的转录本及基因序列,可以用来研究基因表达量、基因功能、结构、可变剪接和预测新的转录本等等。转录组学是功能基因组学研究的重要组成部分。湖北RNA转录组学技术

转录组学分析转录本的结构和表达水平的同时,还能发现未知转录本和稀有转录本。宏转录学组分析

宏转录组学也称为环境转录组学,指从整体水平上研究某一特定环境、特定时期菌群群体全部基因转录情况以及转录调控规律,以揭示微生物在不同环境压力下的适应机制,探索环境与微生物之间的相互作用机理。其适用范围包括人体微生态、环境、工业、农业等领域。宏转录组学以生态环境中的全部RNA为研究对象,避开了微生物分离培养困难的问题,能有效的扩展微生物资源的利用空间。应用领域:包括肠道微生物、口腔微生物、粪便微生物、人体组织微生物。宏转录学组分析

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