定量磷酸化蛋白质翻译修饰组学:蛋白质发生磷酸化是重要的翻译后修饰,它与信号传导、细胞周期、生长发育机理等诸多生物学问题有密切关系。研究蛋白质磷酸化对阐明蛋白质功能具有重要意义。将磷酸化肽段TiO2富集技术和iTRAQ/TMT/Lable free技术相结合,实现对磷酸化蛋白质组学的定量研究。技术原理:在磷酸化肽段富集前先进行 iTRAQ/TMT 标记,然后通过 TiO2 富集方法获得高纯度的磷酸化肽段,之后结合高分辨率质谱完成对样品的定量分析。蛋白质磷酸化修饰的免疫印迹技术优点:检测特异性高。江苏琥珀?;奘蔚鞍字首檠в心男├嘈?/p>
泛素化修饰蛋白组学研究:泛素化修饰蛋白组学是一种重要的翻译后修饰。泛素-蛋白酶体系统介导了真核生物体内80%~85%的蛋白质降解。此外,泛素化修饰还可以直接影响蛋白质的活性和定位,调控包括细胞周期、细胞凋亡、转录调控、DNA 损伤修复以及免疫应答等在内的多种细胞活动。由于翻译后修饰的蛋白质在生物样本中含量低、动态范围广,质谱分析前需要对修饰进行富集以提高其丰度,然后利用传统的定量蛋白组分析手段对富集得到的泛素化肽段样品进行定量分析。北京蛋白质乙?;奘巫檠Х治鲅芯砍<牡鞍字史牒笮奘伟姿峄?/p>
泛素化修饰蛋白质组学样品要求:1、动物组织的样品量湿重不少于200mg。2、植物细菌、噬菌体等微生物类样品量湿重不少于2g。3、富含杂质或蛋白质含量低的样品量湿重不少于5g;如植物的根,木质部、韧皮部组织等。4、体液类(唾液、羊水、脑脊液等)10mL以上,要保证不能溶血;血清要求500μl以上;尿液要求50mL以上。5、如直接提供蛋白质提取物,浓度不少于2 mg/mL,总量不少于1 mg。为保证实验效果,请尽量告知缓冲液成分,如是否有硫脲、SDS、强离子盐等等。另样品中应不含核酸、脂类、多糖等影响分离效果的成分。6、在细胞器蛋白质组学方面,提取细胞器或亚细胞器后,蛋白沉淀量在1 mg以上。
泛素化修饰蛋白质组技术原理:首先将蛋白样本酶解成肽段混合物,然后使用液相色谱对酶解后的肽段混合物进行组分分离以降低样本复杂程度,然后通过高质量的泛素化修饰类抗体和生物材料对修饰肽段进行富集,之后上样至液相色谱-串联质谱中进行分析定量。技术优势:1、高特异性的修饰类泛抗体;2、高分辨率、高灵敏度质谱仪;应用领域:泛素化修饰还参与了细胞周期、增殖、细胞凋亡、分化、转录调控、基因表达、转录调节、信号传递、损伤修复、炎症免疫等几乎一切生命活动的调控。泛素化心血管等疾病的发病密切相关。因此,作为近年来生物化学研究的一个重大成果,它已然成为研究、开发新药物的新靶点。自中而下的蛋白质组学技术可用于组蛋白修饰的分析。
蛋白质翻译后修饰加入的官能团反应有:1、乙?;ǔS诘鞍字实腘末端加入乙酰。2、烷基化——加入如甲基或乙基等烷基。3、甲基化——烷基化中常见的一种,在赖氨酸、精氨酸等的侧链氨基上加入甲基。4、生物素化——用生物素附加物令保存的赖氨酸?;?。5、谷氨酸化——在谷氨酸与导管素及其他蛋白质之间建立共价键。6、甘氨酸化——在一个至超过40种甘氨酸与导管素的C末端建立共价键。7、糖化——将糖基加入天冬酰胺、羟离氨酸、丝氨酸或苏氨酸,形成糖蛋白。8、异戊二烯化——加入如法呢醇及四异戊二烯等异戊二烯。9、硫辛酸化——附着硫辛酸的功能性。蛋白质糖基化修饰组学技术怎么确定位点?河南糖基化修饰蛋白质组学技术服务
蛋白质磷酸化修饰的免疫印迹技术优点:能够特异鉴定单个磷酸化位点。江苏琥珀?;奘蔚鞍字首檠в心男├嘈?/p>
蛋白质翻译后修饰介绍:蛋白质翻译后修饰(PTMs)是指蛋白质在翻译中或翻译后的化学修饰过程。蛋白质翻译后修饰(PTMs)通过给蛋白质添加磷酸酯,乙酸酯,酰胺基或甲基等官能团增加蛋白质组的功能多样性,并影响正常细胞生物学和发病机理的几乎所有方面。蛋白质翻译后修饰在许多细胞过程中起着关键作用,如细胞分化、蛋白质降解、信号传导和调节过程、基因表达调节以及蛋白质相互作用。蛋白质翻译后修饰PTMs通常包括磷酸化,糖基化,泛素化,亚硝基化,甲基化,乙?;驶偷鞍姿?。因此,PTM的特征(包括修饰类别和修饰位点)在细胞生物学以及疾病诊断和预防研究中至关重要。江苏琥珀?;奘蔚鞍字首檠в心男├嘈?/p>