转录组测序推荐的测序数据量？转录组测序所需数据量与所研究物种的基因组大小有关，基因组越大，则所需数据量越大。按照我们的经验来说：常规物种一般建议6G数据即可；基因组较大的物种推荐8G以上数据，比如：小麦建议10G数据起，甘蔗、甘薯建议至少8G数据。转录组测序必须做生物学重复么？需要几个重复？生物学重复是生物实验所必须的，转录组测序也不例外，至少3 次生物学重复。准备生物重复样品时，通过对实验的预先设计和控制，尽可能将与实验处理无关的背景条件控制在同一水平，减少批次效应对结果的影响。转录组广义上指在某一生理条件下，细胞内所有转录组产物的组合。北京单细胞转录组学分析价格

转录组学研究的方法：转录组学是一门在整体水平上研究细胞中所有基因转录及转录调控规律的学科。在早期，由于测序价格昂贵、基因序列数目有限，转录组学研究者只能进行极少数特定基因的结构功能分析和表达研究。近十几年，分子生物学技术的快速发展使高通量分析成为可能，这为真正意义上的转录组学的研究奠定了基础。这些高通量研究方法主要可以分为两类：一类是基于这类方法包括表达序列标签技术、基因表达系列分析技术、大规模平行测序技术、RNA测序技术其中。湖北RNA转录组学技术服务转录组学可应用于非生物环境关系研究、植物与微生物、在表型鉴定中的应用、代谢途径及功能基因组研究。

宏转录组分析：从以G为单位的高通量测序数据中获取研究所需的微生物种类、基因、通路等信息是进行宏转录组研究必须经历的一步。现在网络上分析组学数据的工具五花八门。能否从众多组学工具中选择出适合分析宏转录组数据的软件，能否搭建一套完整、快速、高效、灵敏、高精确的宏转录组分析pipline，直接关乎到后期数据分析的进行。这种技术不只具有宏基因组技术的全部优点，可以检测环境中的活性微生物、活性转录本以及活性功能进行研究，还可以比较不同环境下的差异表达基因和差异功能途径，揭示微生物在不同环境压力下的适应机制，探索环境与微生物之间的互作机理。

单细胞转录组关键步骤：单细胞的分离和捕获：温和分离，稀有细胞。转录本的捕获和扩增：RNA测序需要0.1-1.0ug total RNA，捕获效率10%（5-**NA测序需要1ng DNA，极限稀释加移液分离单细胞；显微操作分选单细胞；流式分选带有表面Marker的单细胞；激光切割实体组织；微流控技术；磁珠捕获，主要用于CTC。单细胞转录组学基本概念：普通转录组的思路也可以应用到单细胞转录组。普通转录组相当于把一群细胞混合到一起去提取RNA，获得的是每个细胞中RNA表达量的平均值。单细胞是把每个细胞单独分出来去提取RNA，然后建库测序，获得是是单个细胞的表达值。在每个细胞里面基因的表达具有随机性，且存在异质性。转录组学是从RNA水平研究基因表达的情况。

转录组学差异基因数目多少比较合理？不同的处理，不同的研究目标，差异基因的数目是不同的，从几十个到几千个都有可能。但是如果差异基因数目是个位数或者上万，那么就需要和分析人员沟通一下，查一查是否有问题。转录组学差异基因太多，注释信息太杂乱，怎么挑选目标基因？对不同的差异组合进行维恩图分析，挑选共有或者特有的差异基因作为后续的研究对象；根据前人的文献报道，挑选相关差异基因，不要局限在自己研究的物种上。单细胞转录组学技术： Anydeplete技术首先通过随机引物进行一链合成，一链合成引入核苷酸类似物，用于酶切打断，二链合成同样引入核苷酸类似物用于保证链特异性。然后两端加上接头，接头一条链也带有核苷酸类似物，用于酶切降解。当形成单链文库后，设计特异性引物与rRNA形成文库结合，一轮退火延伸，rRNA文库形成双链结构。circRNA转录组学一类具有闭合环状结构的非编码RNA分子。武汉circ RNA转录组学

转录组即一个活细胞所能转录出来的所有RNA的总和，是研究细胞表型和功能的一个重要手段。北京单细胞转录组学分析价格

宏转录组学也称为环境转录组学，指从整体水平上研究某一特定环境、特定时期菌群群体全部基因转录情况以及转录调控规律，以揭示微生物在不同环境压力下的适应机制，探索环境与微生物之间的相互作用机理。其适用范围包括人体微生态、环境、工业、农业等领域。宏转录组学以生态环境中的全部RNA为研究对象，避开了微生物分离培养困难的问题，能有效的扩展微生物资源的利用空间。应用领域：包括肠道微生物、口腔微生物、粪便微生物、人体组织微生物。北京单细胞转录组学分析价格