iTRAQ定量蛋白组学技术:iTRAQ(Isobaric Tag for Relative Absolute Quantitation)定量蛋白质组学技术多肽体外标记定量技术。这种技术同TMT定量蛋白组学技术相似,可研究不同病理条件下或者不同发育阶段的组织样品中蛋白质表达水平的差异。Label-free:Label-free定量,即非标记的定量蛋白质组学,不需要对比较样本做特定标记处理,只需要比较特定肽段/蛋白在不同样品间的色谱质谱响应信号便可得到样品间蛋白表达量的变化,通常用于分析大规模蛋白鉴定和定量时所产生的质谱数据。蛋白质组学在生物学领域的研究中的应用是怎样的?武汉Label free多肽组学应用
蛋白质组学研究内容有什么?对人类而言,蛋白质组学的研究要服务于人类的健康,主要指促进分子医学的发展。如寻找药物的靶分子。很多药物本身就是蛋白质,而很多药物的靶分子也是蛋白质。药物也可以干预蛋白质-蛋白质相互作用。在基础医学和疾病机理研究中,了解人不同发育、生长期和不同生理、病理条件下及不同细胞类型的基因表达的特点具有特别重要的意义。这些研究可能找到直接与特定生理或病理状态相关的分子,进一步为设计作用于特定靶分子的药物奠定基础。杭州定量N糖基化蛋白质组学蛋白质组学与其它学科的交叉也将推动新技术、新方法的发展。
蛋白质组学主要以全蛋白组(组织、细胞)、线粒体蛋白组、叶绿体蛋白组和外泌体蛋白组为研究对象,通过对蛋白组进行定性、定量、分子功能分析、通路互作分析和蛋白互作分析,揭示生物学功能、作用机制、疾病诊断的标志物以及预测蛋白的上、下游变化关系。蛋白质组学可以克服核酸水平预测的不确定性、反映核酸翻译后修饰情况。常用技术:非靶向蛋白组学:蛋白质定性(胶条鉴定和溶液鉴定),高通量定量蛋白组(Labelfree、iTRAQ/TMT和DIA定量),多肽组学。
iTRAQ/TMT标记定量蛋白质组技术优势:1、结果可靠:基于高灵敏度和高分辨的串联质谱方法,定性与定量同步进行,同时得出定性和定量结果,重复样品间的蛋白表达量相关性高;2、灵敏度高:分级分离,降低样品复杂度,相比凝胶电泳观测到的蛋白变化在2倍以上,iTRAQ计算出的蛋白变化在1.3-1.6倍之间,可检测低丰度蛋白;3、分离能力强:可分离出酸/碱性蛋白,小于10KDa或大于200KDa的蛋白、难溶性蛋白等;4、自动化程度高:液质联用,自动化操作,分析速度快,分离效果好。目前国际上许多大型药物公司正投入大量的人力和物力进行蛋白质组学方面的应用性研究。
定量蛋白质组学技术:定量蛋白质组学技术主要分为标记(label)和非标记(labelfree)定量策略,标记策略又分为体内标记和体外标记两种。细胞内蛋白质组丰度的动态变化对各种生命过程有重要影响。例如在许多疾病的发生和发展进程中,常常伴随着某些蛋白质的表达异常。定量蛋白质组学就是把一个基因组表达的全部蛋白质或一个复杂的混合体系中所有的蛋白质进行精确的定量和鉴定。非标记(labelfree)的定量蛋白组学技术,Labelfree定量蛋白组学技术是通过液质联用技术对蛋白质酶解肽段进行质谱分析,无需使用昂贵的稳定同位素标签做内部标准,只需分析大规模鉴定蛋白质时所产生的质谱数据,比较不同样品中相应肽段的信号强度,从而对肽段对应的蛋白质进行相对定量。蛋白质组学现已被普遍应用于生命科学研究领域。杭州定量N糖基化蛋白质组学
蛋白质组学将成为寻找疾病分子标记和药物靶标有效的方法之一。武汉Label free多肽组学应用
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