用于评估环境中微生物的种类和数量,监测环境质量及污染情况。环境微生物检测:检测水体、土壤、空气等环境样本中有害微生物(如大肠杆菌、蓝藻相关基因等)的含量,评估环境受污染程度及生态风险。微生物群落分析:通过定量特定功能基因(如降解污染物的基因),研究环境中微生物的代谢活性及生态功能。在药物筛选、药效评估和药代动力学研究中起到重要作用。药物靶点验证:通过检测药物作用后靶点基因的表达变化,验证靶点的有效性,为新药研发提供依据。药效评估:定量分析药物处理后疾病相关基因的表达量变化,评估药物的疗效及比较好剂量。耐药性检测:检测病原体(如细菌、病毒)中耐药基因的表达或突变,指导临床合理用药,避免耐药性的产生。扩增效果优异的柏恒RePure系列PCR仪在PCR实验中能够准确地放大目标DNA片段,提供可靠的实验结果。无锡QPCR基因扩增仪PCR仪电话
1. DNA 指纹分析应用:扩增人类基因组中的短串联重复序列(STR),如 D21S11、TH01 等位点,用于个体识别、亲子鉴定和犯罪现场证据分析。案例:通过 PCR - 毛细管电泳技术构建 DNA 图谱,比对嫌疑人和现场生物样本(如血迹、毛发)。2. 物种鉴定应用:扩增动物或植物的特定基因(如细胞色素 C 氧化酶亚基 I 基因,COI),鉴别濒危物种或非法贸易中的生物来源。案例:检测**象牙中的大象 DNA,打击野生动物非法交易。1. 食品微生物检测应用:检测食品中的致病菌(如沙门氏菌、大肠杆菌 O157:H7)或过敏原基因(如花生、大豆过敏原蛋白基因),保障食品安全。案例:通过实时荧光定量 PCR(qPCR)快速筛查即食食品中的李斯特菌。2. 环境微生物监测应用:扩增环境样本(如水、土壤)中的微生物 16S rRNA 基因(细菌)或 18S rRNA 基因(***),分析微生物群落多样性或检测特定污染物降解菌。案例:监测污水处理厂中脱氮菌的丰度,评估处理效率。南京普通基因扩增仪PCR仪检测RePure-A配备的人性化操作界面和直观的软件系统使得用户能够轻松设置实验程序。
准备试剂:准备 PCR 反应所需的各种试剂,包括 Taq DNA 聚合酶、dNTPs、缓冲液、引物、Mg2?等。引物是决定 PCR 特异性的关键因素,需根据待检测的转基因成分的特定基因序列设计合成特异性引物。配置反应液:按照一定的比例和顺序,将各种试剂加入到无菌的 PCR 管中,配置成 PCR 反应体系。一般反应体系包括 10×PCR 缓冲液、2.5mmol/L dNTPs、25mmol/L MgCl?、10μmol/L 引物、5U/μL Taq DNA 聚合酶以及适量的模板 DNA,总体积通常为 20μL 或 50μL。
PCR仪是利用聚合酶链式反应(PCR)技术,在体外对特定DNA片段进行大量扩增的仪器。其原理是通过高温变性、低温退火及适温延伸等几步反应组成一个周期,循环进行,使目的DNA得以迅速扩增。具体过程如下:高温变性:将待扩增的DNA双链在高温(90-95℃)下解链,形成单链DNA模板。低温退火:降低温度(一般为50-65℃),使引物与单链DNA模板特异性结合。适温延伸:在DNA聚合酶的作用下,以引物为起始点,在适宜温度(一般为72℃左右)下,以dNTP为原料,沿着模板链合成新的DNA链。采用独特的荧光检测技术,能够在PCR过程中实时监测荧光信号的变化,从而实现对DNA或RNA的定量分析。
启动反应与结果分析确认参数无误后,启动 qPCR 程序,仪器自动运行并实时显示荧光曲线。反应结束后,通过软件查看结果:定量结果:根据标准曲线计算未知样本的初始模板浓度(定量),或通过 ΔΔCt 法分析相对表达量(相对定量)。溶解曲线:若出现单一尖锐峰,说明扩增特异性良好;若有杂峰,需排查引物或反应条件问题。 污染防控(重点)核酸污染:严格分区操作:将试剂配制区、样本处理区、PCR 扩增区分开,避免交叉污染。使用滤芯吸头,每次加样后更换吸头,避免移液器接触样本或试剂瓶口。定期用 10% 次氯酸钠或 DNA 酶清洁实验台面、移液器和仪器样品槽,紫外灯照射消毒操作区(30 分钟以上)。试剂污染:试剂分装保存(避免反复冻融),阴性对照(无模板)和空白对照(无菌水)必须设置,以监测是否污染。RePure-(D)B双槽PCR操作简便,具有易读的液晶显示屏和直观的操作界面,方便用户进行实验操作。南京双槽基因扩增仪PCR仪
柏恒RePure系列PCR仪进行PCR扩增可以获得高度特异性和稳定性的扩增产物。无锡QPCR基因扩增仪PCR仪电话
引物设计与条件优化场景:新引物开发时,需测试不同退火温度(Tm 值)以避免非特异性扩增。例:针对某基因设计 5 对引物,通过梯度 PCR 同时测试每对引物在 55℃~65℃范围内的比较好退火温度,直接筛选出特异性条带**亮的组合。优势:传统方法需多次**实验,梯度 PCR *需 1 次运行即可完成多条件验证。复杂模板的扩增优化场景:扩增富含 GC 碱基对(>70%)的模板、长片段 DNA(>5kb)或存在二级结构的序列时,需精细优化温度参数。例:扩增某病毒全基因组(约 15kb)时,通过梯度功能测试不同延伸温度(如 68℃~72℃)对产物完整性的影响,确定比较好延伸条件。无锡QPCR基因扩增仪PCR仪电话