羟甲基化DNA免疫沉淀测序（HydroxymethylatedDNAImmunoprecipitationSequencing，hMeDIP-Seq）是通过5hmC特异性抗体富集羟甲基化的DN**段，然后结合高通量测序技术在全基因组水平上以较小的数据量，快速、高效地寻找羟甲基化区域。可广泛应用于羟甲基化与疾病关系研究以及羟甲基化在胚胎发育过程中的研究。样本要求：基因组DNA:>=3ug；样品浓度>50ng/ul；无RNA和蛋白污染建库测序：测序策略：IlluminaHiSeq,PE150;测序深度：20-30Mreads。信息分析：基于全基因组范围的羟甲基化分析，数据质控，Peak锋Calling，Peak锋在基因组、染色体、功能元件上的分布，多样本羟甲基化差异聚类，差异羟甲基化DMR鉴定及相关基因的功能分析，结合项目背景和科学问题的数据亮点挖掘。焦磷酸测序技术是甲基化检测新的金标准。浙江6mADNA甲基化口碑推荐

industryTemplate浙江hMeDIP-SeqDNA甲基化售后服务通过甲基化数据与耐药基因Panel数据联合分析。

上皮型钙黏附素（E-cadherin）是介导细胞间粘附的一种跨膜糖蛋白，其编码基因CDH-1属于**侵袭转移抑制基因。在**组织中，E-cadherin表达的下调或沉默可导致细胞间相互黏附力减弱，造成**细胞的分散，脱离原发灶处而转移。而E-cadherin下调的因素之一就是其启动子区域CpG岛的超甲基化。**细胞突破血管内皮及基底膜进入血循环是**细胞侵袭和转移的重要步骤。基底膜组成蛋白Nidogen的缺失将严重影响基底膜的完整性，有利于**细胞顺利通过进入血循环进而发生侵袭转移。有研究表明，Nidogen基因启动子在**细胞中表现出很高的甲基化水平，而在正常细胞中却极少或没有发生甲基化。另外，某些miRNA（如MiR-148a、miR-34b/c、miR-9）能够起到抑制**细胞生长和转移的作用，而在**细胞中，这些miRNA通常由于发生超甲基化而沉默。

芯片种类：Agilent**甲基化芯片，8x60K●和合作伙伴在Agilent公司定制的Promoter芯片。●绝大多数基因是针对基因启动子区域的CpG岛设计探针。●芯片上一共有4160个功能注释比较明确的基因，其中2128个和**发生有关系。●从功能上分，有256基因和细胞凋亡有关，1273个基因和信号传导有关，487个基因和压力和衰老有关。●特别适用于**甲基化研究。案例分析：用Agilent定制甲基化芯片和表达谱芯片共同筛选乳腺*患者的高甲基化基因，并探讨甲基化与基因表达的关系为了寻找乳腺*早期诊断的甲基化标记基因，探讨基因甲基化水平与基因表达量之间的关系，科研者使用甲基化芯片和表达谱芯片进行了相关研究。研究中，甲基化程度检测使用BSP法和COBRA分析，基因表达水平检测用RT-PCR。结果，在乳腺*患者中检测到70对高度甲基化差异***的基因，表达谱芯片分析结果显示在乳腺*患者中这70个基因大部分不表达；RT-PCR结果也显示大部分基因表达量很低甚至不表达。这种研究策略，能够直观方便的筛查患者甲基化基因，有效地寻找乳腺*标记基因，对研究甲基化基因调控基因表达提供研究基础。焦磷酸测序能提供基于序列测定的SNP检测、等位基因频率分析和甲基化检测。

第三代测序技术的出现，更是让甲基化的直接测定成为可能。一年前，美国PacificBiosciences公司利用独有的单分子实时(SMRT)测序技术，直接测定了DNA的甲基化。这项成果发表在《NatureMethods》杂志上。甲基化特异性PCR（MS-PCR）：DNA在亚硫酸氢盐作用后，DNACpG若无甲基化，则序列中的C改变为U，若有甲基化则保持不变，因此从理论上讲，用不同的引物做PCR，即可检测出这种差异，从而确定基因有无CpG岛甲基化。因此根据目的基因修饰前后的改变，就可以相应设计M和U引物，有时我们需要设计两轮引物。这种方法灵敏度高，无需特殊仪器，因此经济实用，是目前应用**为***的检测方法。不过也存在一定的局限性，预先需要知道待测片段的DNA序列，引物的设计非常重要。另外，亚硫酸氢盐处理也十分关键，若处理不完全则可能导致假阳性的出现。基于高通量测序平台的甲基化图谱分析。山东850K芯片DNA甲基化怎么样

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焦磷酸测序（Pyrosequencing）技术服务基于QIAGEN公司的PyroMarkQ96ID平台，能提供基于序列测定的SNP检测、等位基因频率分析和甲基化检测，杂合子缺失及细菌和病毒分型等技术服务。优势：得到定量序列结果的技术，极高的准确性，重现性**，实验设计灵活。应用：可以用于任何遗传多态性的分析甲基化研究的平台通量、低成本的快速临床微生物诊断。报告模板：1材料1.1试剂与试剂盒1.2仪器2方法2.1DNA抽提2.1甲基化修饰2.2纯化亚硫酸盐修饰的DNA2.3甲基化PCR2.4Pyrosequencing检测。浙江6mADNA甲基化口碑推荐