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外泌体转录组学研究方法

来源: 发布时间:2022-01-19

全转录组测序为什么需要构建两个文库?全转录组测序需要构建2个测序文库,一个小RNA文库和一个去除核糖体RNA的链特异性文库,然后分别上机测序。小RNA长度较短,一般小于50nt,采用测序策略为50SE。其他三类RNA序列一般大于200,通常在1000以上,可达几万,通过片段化构建150PE测序文库。然后小RNA文库可以获得miRNA序列信息,去核糖体的链特异性文库可以获得mRNA、lncRNA和circRNA的序列信息。转录组学即特定细胞在某一功能状态下转录出来的所有RNA的总和,包括mRNA和非编码RNA。转录组学测序样品纯度要求,电泳检测28S:18S至少大于1.8。外泌体转录组学研究方法

普通转录组学测序适用于哪些情况?普通转录组测序主要适用于两大类:一是不同的生长阶段或者发育过程;二是不同的环境、药物、病原菌等逆境胁迫处理。转录组学测序必须做生物学重复么?需要几个重复?生物学重复是生物实验所必须的,转录组测序也不例外,至少3次生物学重复。准备生物重复样品时,通过对实验的预先设计和控制,尽可能将与实验处理无关的背景条件控制在同一水平,减少批次效应对结果的影响。转录组学测序可以同时测到mRNA、lncRNA、micRNA以及circRNA么?我们通常所讲的转录组测序只能测到mRNA。但是全转录组测序通过构建两个测序文库(一是小RNA测序文库、二是lncRNA测序文库)是可以测到以上4种RNA的。山东RNA转录组学分析鉴定转录组学是一门在整体水平上研究细胞中基因转录的情况及转录调控规律的学科。

全转录组测序:狭义的转录组默认只包含mRNA,但是广义的转录组指的是细胞或组织中所有转录产物的汇合,其中包含mRNA和非编码RNA(non-codingRNA,ncRNA)。非编码RNA目前的研究多集中在具有调控功能的smallRNA(以miRNA为表示),长链非编码RNA(longnon-codingRNA,lncRNA)和环状RNA(circularRNA,circRNA)上,而这几类ncRNA的调控对象都和mRNA有关。因此,全转录组即包含了ncRNAs和mRNA。全转录组测序即对以上四种ncRNA进行测序,并分析这四者之间复杂的相互作用关系。

转录组学测序结果的影响因素?RNA的降解严重影响测序的质量,RNA降解后,加入poly-A后无法捕获纯化mRNA,因此,随机引物反转录无法得到全部的cDNA,导致测序结果出现明显的3‘-和5’-偏向。文库中的poly-A多聚物的存在会对测序信号产生干扰,影响测序结果的准确性;同时由于转录组中转录本的丰度不一致,实验前需要对样本进行均一化处理,否则高丰度的表达基因会掩盖低丰度表达基因,导致寻找新基因失败或者是获得大量无意义的重复序列。转录组学测序比其他研究方法有哪些优势?

转录组学(Transcriptomics),是一门在真整体水平上研究细胞中基因转录的情况及转录调控规律的学科,从RNA水平研究基因的表达情况。转录组测序是通过二代测序平台快速全方面地获得某一物种特定细胞或组织在某一状态下的几乎所有的转录本及基因序列,可以用来研究基因表达量、基因功能、结构、可变剪接和预测新的转录本等等。转录组(transcriptome),是指特定生长阶段某组织或细胞内所有转录产物的汇合,狭义上指所有mRNA的汇合。转录组学即特定细胞在某一功能状态下转录出来的所有RNA的总和,包括mRNA和非编码RNA。转录组学测序可以同时测到mRNA、lncRNA、micRNA以及circRNA么?贵州全转录学组分析价格

转录组学包括:mRNA、ncRNA、rRNA等。外泌体转录组学研究方法

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