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浙江定量N糖基化蛋白质组学研究内容

来源: 发布时间:2022-01-16

蛋白质组学主要以全蛋白组(组织、细胞)、线粒体蛋白组、叶绿体蛋白组和外泌体蛋白组为研究对象,通过对蛋白组进行定性、定量、分子功能分析、通路互作分析和蛋白互作分析,揭示生物学功能、作用机制、疾病诊断的标志物以及预测蛋白的上、下游变化关系。蛋白质组学可以克服核酸水平预测的不确定性、反映核酸翻译后修饰情况。常用技术:非靶向蛋白组学:蛋白质定性(胶条鉴定和溶液鉴定),高通量定量蛋白组(Labelfree、iTRAQ/TMT和DIA定量),多肽组学。蛋白质组学技术有生物质谱。浙江定量N糖基化蛋白质组学研究内容

蛋白质组学发展趋势:技术发展方面:蛋白质组学的研究方法将出现多种技术并存,各有优势和的特点,而难以象基因组研究一样形成比较一致的方法。除了发展新方法外,更强调各种方法间的整合和互补,以适应不同蛋白质的不同特征。另外,蛋白质组学与其它学科的交叉也将日益明显和重要,这种交叉是新技术新方法的活水之源,特别是,蛋白质组学与其它大规模科学如基因组学,生物信息学等领域的交叉,构成组学(omics)生物技术研究方法,所呈现出的系统生物学(SystemBiology)研究模式,将成为未来生命科学比较令人激动的新前沿。广东Label free多肽组学研究蛋白质组的概念与基因组的概念有许多差别。

PRM靶向蛋白质组学:是一种基于Orbitrap为表示的高分辨、高精度质谱的离子监视技术,首先利用四级杆质量分析器的选择能力,用Q1选择目标肽段的母离子,随后在collisioncell中对母离子进行碎裂,然后利用Orbitrap分析器在二级质谱中检测所选择的母离子窗口内的所有碎片信息。这样能够对目标蛋白质、目标肽段(如发生翻译后修饰的肽段)进行选择性检测,即可对目标蛋白质/肽段进行相对(一定)定量。从而实现对复杂样本中的目标蛋白质/肽段进行准确地特异性分析。

常规蛋白质组学:Labelfree多肽组学:顾名思义,就是不使用任何标记方法,直接对肽段进行质谱鉴定和定性定量分析。实验流程简单,只需要对蛋白进行常规酶解和除盐步骤即可上机。定量方式分为两种:峰面积(Peakintensity)和峰计数(Spectralcount),常用的是峰面积。不过,由于质谱采集时只选取topN的母离子进行二级碎裂和MS2检测,所以会丢失一些丰度较低的肽段信息,缺失值比较多。TMT/iTRAQ标记定量蛋白组学:TMT全称是TandemMassTag,是经典化学标记试剂,普遍用于差异表达蛋白质组分析研究中。该技术采用6重、10重或16重同位素标签,与肽段的氨基发生共价结合反应,可实现同时对6个/10个/16个不同样品中蛋白质的定性和定量分析。(目前16标鹿明生物可提供技术服务)。蛋白质组学是以蛋白质组为研究对象,研究细胞、组织或生物体蛋白质组成及其变化规律的科学。

蛋白质组的研究不但能为生命活动规律提供物质基础,也能为众多种疾病机理的阐明及攻克提供理论根据和解决途径。通过对正常个体及病理个体间的蛋白质组比较分析,我们可以找到某些“疾病特异性的蛋白质分子”,它们可成为新药物设计的分子靶点,或者也会为疾病的早期诊断提供分子标志。确实,那些世界范围内销路比较好的药物本身是蛋白质或其作用靶点为某种蛋白质分子。因此,蛋白质组学研究不只是探索生命奥秘的必须工作,也能为人类健康事业带来巨大的利益。蛋白质组学的研究是生命科学进入后基因时代的特征。生物质谱技术是蛋白质组学研究中比较重要的鉴定技术。浙江定量N糖基化蛋白质组学研究内容

蛋白质组学包括翻译后的修饰。浙江定量N糖基化蛋白质组学研究内容

蛋白组学研究怎么做?PRM:平行反应监测(ParallelReactionMonitoring)是一种基于高分辨、高精度质谱的离子监视技术,能够对目标蛋白质、目标肽段(如发生翻译后修饰的肽段)进行选择性检测,从而实现对目标蛋白质/肽段进行一定定量,因此也被称之为基于液相色谱质谱联用技术的WesternBlot(LC-MSMSbasedWesternBlot,L-WB)。PRM技术基于Q-Orbitrap为表示的高分辨、高精度质谱平台,首先利用四级杆质量分析器的选择能力,用Q1选择目标肽段的母离子,随后在Collisioncell中对母离子进行碎裂,之后利用Orbitrap分析器在二级质谱中检测所选择的母离子窗口内的所有碎片信息。这样即可对复杂样本中的目标蛋白质/肽段进行准确地特异性分析。浙江定量N糖基化蛋白质组学研究内容

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