单细胞转录组学测试步骤：第1步就是把单个细胞分选出来。分选的方式也比较多，物理切割，酶消化，FACS分选等。假如已经分到了一个单细胞，跟常规的转录组步骤上是一样的。下一步就是把单细胞里的RNA提取出来去建库测序。但是一个细胞里的RNA含量是比较少的，难建库成功。这个里面“量”的概念很有意思。比如说单细胞量少，需要特殊处理。因为单细胞里面RNA的量少，所以说整个富集的过程中会出现一部分基因在一个细胞里能检测到，在另外一个细胞里面检测不到，而每个细胞里面的检测存在一个随机性，同时单细胞测序深度比较低，所以说分析时相比于普通转录组有一些是需要特别注意，但整体的分析思路是类似的。转录学组测序能够提供更高的检测通量。北京全转录学组服务

转录组是干什么用的，和表达谱有什么区别？转录组，指细胞某一时期所有基因的转录水平。转录组学，是一门在整体水平上研究细胞中基因转录的情况及转录调控规律的学科。简而言之，转录组学是从RNA水平研究基因表达的情况。对RNA的分析。分析应该是分几个维度的DNA到RNA，RNA的剪切拼接，RNA的翻译。表达谱有两种，分别是基因表达谱和蛋白质表达谱。基因表达谱是指细胞中所有基因表达的格局。通过比较分析基因表达谱，可从整体水平研究代谢机制，认识基因相互作用的网络关系，发现重要基因。广东全长转录学组研究转录组学灵敏度高，可以检测细胞中少至几个拷贝的稀有转录本。

circRNA转录组学：是一类具有闭合环状结构的非编码RNA分子，没有5′帽子结构和3′poly（A）结构，主要位于细胞质或储存于外泌体中，不受RNA外切酶影响，表达更稳定且不易降解，已被证明普遍存在于多种真核生物体内[1]。大多数circRNA是由外显子环化而成，也有部分circRNA是由内含子环化而成的套索结构。同时由于circRNA含有大量的miRNA应答原件（MREs），能与AGO蛋白形成RNA诱导沉默复合体（RISC）的催化关键，然后导致circRNA降解。根据来源，circRNA可大致分为四类：全外显子型的circRNA，内含子和外显子组合的EIcircRNA，内含子组成的套索型ciRNA，由病毒RNA基因组、tRNA、rRNA、snRNA等环化产生的circRNA。

转录组学测序流程：1、样品RNA准备。2、测序文库构建。3、DNA成簇(Cluster)扩增。4、高通量测序(Illumina)。5、数据分析。转录组的分析大致有以下几种情况：1、同一物种在发育过程中的各时间节点的基因表达特点及存在的差异；2、不同品系之间存在的差异表达基因；3、不同的外界条件处理，如细菌、病毒、光照、紫外、干旱、高温、高盐胁迫，对基因表达的影响；4、同一个体，不同组织之间的基因表达差异。简而言之，转录组学是从RNA水平研究基因表达的情况。什么是转录组学测序？

单细胞转录组学技术：10×genomics技术：首先在凝胶微珠上种上特定的DNA的片段，DNA的片段由三部分组成：Barcode、UMI、PolyT组成。Barcode是16个碱基的长度。一共有400万种Barcode，一个微珠是对应于一种Barcode，通过这400万种Barcode，可以把凝胶微珠给区分开（通过barcode可以把cell分开）。UMI是一段随机序列，也就是说每一个DNA分子，都有自己的UMI序列（一个微珠上有很多种UMI，通过UMI可以把RNA分子分开，并可以标记RNA分子的数量）。10个碱基长的UMI，有100万种序列的变化（4^10=1,048,576），UMI的作用是为了区分哪些reads是来自于一个原始cDNA分子区分基因片段重复还是duplication及区分是真实的SNP位点还是PCR产生的突变。通过10×genomics仪器将单个细胞与单个凝胶微珠通过油相混在一起，形成油包水的小微滴。转录组学能准确地识别可变剪切位点及cSNP，UTR区域。广东全长转录学组研究

转录组学测序比其他研究方法有哪些优势?北京全转录学组服务

单细胞转录组关键步骤：单细胞的分离和捕获：温和分离，稀有细胞。转录本的捕获和扩增：RNA测序需要0.1-1.0ugtotalRNA，捕获效率10%（5-**NA测序需要1ngDNA，极限稀释加移液分离单细胞；显微操作分选单细胞；流式分选带有表面Marker的单细胞；激光切割实体组织；微流控技术；磁珠捕获，主要用于CTC。它的一个优点是可以结合流式细胞荧光分选（FACS,fluorescentactivatedcellsorting）根据表面Marker分选细胞。因此特别适合分选细胞子集用于测序。它的另一个优点是可以获得细胞形态全览图，提供另外一个维度的信息，可用于鉴定微孔中是否有损伤的细胞或双份细胞，主要缺点是通量低且每个细胞所需的工作量相当大。北京全转录学组服务

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