蛋白质翻译后修饰组学:蛋白质翻译后修饰(Post-translational modification, PTM)是指对翻译后的蛋白质进行共价加工的过程。它通过在一个或多个氨基酸残基加上修饰基团,可以改变蛋白质的物理、化学性质,进而影响蛋白质的空间构象和活性状态、亚细胞定位、折叠及其稳定性以及蛋白质-蛋白质相互作用。蛋白质翻译后修饰的丰度变化在生命活动研究中具有重大意义,异常的翻译后修饰会导致多种疾病的发生。质谱可以分辨蛋白质修饰前和修饰后分子量上的变化,因此只要知道靶蛋白翻译后修饰前后分子量的变化,就能对翻译后修饰方式进行鉴定和定量。蛋白质有哪些翻译后修饰?广州琥珀?;奘蔚鞍字首檠а芯?/p>
翻译后修饰蛋白组学分析:蛋白质组学的研究的工作不只聚焦于细胞不同生长时期或是疾病条件下的蛋白质表达水平变化,许多至关重要的生命进程不只由蛋白质相对丰度控制,更重要的是被时空特异分布的、可逆的翻译后修饰所调控,因而揭示翻译后修饰发生规律是解析蛋白质复杂多样的生物功能的一个重要前提。蛋白质发生翻译后修饰时其分子质量会发生响应的改变,通过质谱能够精确测定蛋白质或多肽的分子质量。同时,发生翻译后修饰的蛋白质再样本中含量低且动态范围广,所以在质谱检测前需要对发生修饰的蛋白质或肽段进行富集。贵州蛋白质糖基化修饰组学分析乙?;奘问翘迥诒J氐目赡孀牡鞍仔奘?。
蛋白质磷酸化修饰组学技术优点:1、全方面性:磷酸化蛋白质组学以整个细胞蛋白为研究对象,研究内容包括了细胞内具有生命功能的蛋白,如细胞增生、细胞分裂和细胞分化等相关蛋白,因而研究更为全方面。2、可靠性:传统的生物学研究蛋白质磷酸化往往针对特定条件,以两个蛋白或更多蛋白之间的相互作用为出发点,具有局限性,缺乏整体认识。磷酸化蛋白质组学则可检测不同蛋白激酶及磷酸化酶对同一个蛋白磷酸化程度的影响,因而结果具有普遍性和可靠性。3、有效性:磷酸化蛋白质组学反映的是细胞内真实发生的事件,在一次试验中考虑了不同变量,克服了生物学中逐步添加变量的缺陷。4、探索性:磷酸化蛋白质组学以细胞内蛋白为研究对象,相对于传统的生物学研究以及蛋白质芯片,更易发现未知的新磷酸化位点和磷酸化蛋白质。如果可以联合生物学技术,则可以发现具有磷酸化或者去磷酸化功能的酶。
蛋白质乙酰化修饰的功能:目前对乙?;奘蔚墓δ苎芯恐饕性诙韵赴嫉骺兀约岸源煌返牡骺卣饬礁龇矫妗T谥诙嘁阴;奘蔚牡鞍字手?,研究较多的要数细胞核中包围DNA的组蛋白了。组蛋白和DNA缠绕构成核小体,组蛋白的甲基化、乙?;奘文芄坏鹘贒NA缠绕的松紧度,从而对基因表达进行调控,因此,组蛋白的翻译后修饰是表观遗传学研究中的重要一环。另外,研究也发现乙酰化修饰普遍存在于人的多种代谢酶之中,并且参与调控代谢通路以及代谢酶的活性。其中在肝脏这样的代谢中就存在着多种代谢酶被高度乙酰化。在早期的研究中,乙?;奘我恢北蝗衔钦婧讼赴赜械囊恢址牒笮奘巍?/p>
质谱分析乙酰化蛋白质组:质谱分析技术可以对蛋白质组中的乙?;鞍捉屑?、乙酰化位点定位以及定量。当质谱用于乙?;康鞍鬃檠芯恐惺保蛭阴;鞍字试谏镅局泻康汀⒍段Ч?,需要先对乙?;亩谓懈患?,然后再对富集得到的乙酰化肽段样品进行定量分析。质谱定量乙?;鞍鬃椴捎秒亩卧し掷虢档透叻岫鹊鞍椎挠跋欤岷厦庖吖渤恋硗ü咝У目固甯患阴;碾亩危佣迪执蠊婺R阴;募岸?。为了鉴定和定量更多的乙酰化肽段,在酶切过程中还可使用多种不同的酶对蛋白样品进行酶切。蛋白质翻译后修饰在蛋白质中磷酸化位点分析时应该注意些什么问题?广州琥珀酰化修饰蛋白质组学研究
蛋白质翻译后修饰的作用主要是改变蛋白质的活性。广州琥珀?;奘蔚鞍字首檠а芯?/p>
蛋白质乙酰化修饰组学技术:乙?;奘问翘迥诒J氐目赡孀牡鞍仔奘?,对细胞核内转录调控因子的刺激有着重要的作用。此外,还存在的非组蛋白乙酰化修饰参与了代谢通路及代谢酶活性的调节。采用肽段预分离降低高丰度组蛋白对蛋白乙?;ǖ挠跋?,再结合免疫共沉淀通过抗体富集乙?;碾亩危佣迪忠阴;募岸俊Q芬螅?、SDS-PAGE条带:5个以上可见考染条带。2、溶液(目标蛋白质):目标蛋白总量>50μg,目标蛋白浓度>80%。3、溶液(大规?;旌系鞍字剩旱鞍鬃芰?1mg,蛋白浓度>1μg/μl。广州琥珀?;奘蔚鞍字首檠а芯?/p>
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