定量蛋白质组学技术:定量蛋白质组学技术主要分为标记(label)和非标记(labelfree)定量策略,标记策略又分为体内标记和体外标记两种。细胞内蛋白质组丰度的动态变化对各种生命过程有重要影响。例如在许多疾病的发生和发展进程中,常常伴随着某些蛋白质的表达异常。定量蛋白质组学就是把一个基因组表达的全部蛋白质或一个复杂的混合体系中所有的蛋白质进行精确的定量和鉴定。非标记(labelfree)的定量蛋白组学技术,Labelfree定量蛋白组学技术是通过液质联用技术对蛋白质酶解肽段进行质谱分析,无需使用昂贵的稳定同位素标签做内部标准,只需分析大规模鉴定蛋白质时所产生的质谱数据,比较不同样品中相应肽段的信号强度,从而对肽段对应的蛋白质进行相对定量。蛋白质组学的研究主要促进分子医学的发展。济南定量N糖基化蛋白质组学分析方法
蛋白质组学,指对某一基因组所表达的所有蛋白质及其特征进行大规模、系统化地研究,以期望在蛋白质水平上解释控制复杂的生命活动的分子网络。研究的内容主要包括:组成蛋白质一级结构氨基酸的序列特征、蛋白质的丰度、蛋白质活性、蛋白质的修饰、亚细胞定位和三维结构、蛋白质之间的相互作用以及对蛋白质的高阶复合物结构。质谱技术的发展为这些研究提供了有力的技术支撑,使得许多有实际应用的蛋白质组功能研究成为可能,包括翻译后修饰的整体分析,蛋白质相互作用网络的重建和模式生物蛋白表达谱的定量研究;在临床医学和转化医学研究中也越来越多地应用到蛋白质组学技术。浙江Label free多肽组学质谱鉴定在未来的发展中,蛋白质组学的研究领域将更加普遍。
蛋白质组学在医疗和健康方面有什么应用?基于质谱的蛋白质组学是目前比较主流的高通量蛋白质研究手段,当前在医疗健康方面的应用主要集中于基础研究和转化医学。随着质谱、系统生物学、生物信息学等相关学科的发展,我认为今后我们会更多地在现实生活中见到蛋白质组学相关的应用。如定量胰岛素、鉴定血红蛋白氨基酸突变(镰刀形红细胞症)、糖化血红蛋白比例测定等。从测试体量估计,应该远小于1%的ELISA测试量。由于成本和通量等原因,蛋白质组学技术并不如ELISA适合大量的日常分析。但对于一些分析有问题的项目,采用基于质谱(或二维胶等手段)的蛋白质组学有独特的技术优势。另外,蛋白质组学方法开发和验证周期短,在中高级特殊应用(如极少使用的特殊蛋白指标临床检测、未知疾病研究和控制)中也有其独特优势。
Labelfree非标记定量蛋白质组学技术特点:(1)不需要标记处理,操作简单,成本低、实验周期短;(2)每个样品单独处理、上机;(3)可以做任意样本的总蛋白质差异定量,样品类型不受限制;(4)对单个样品的蛋白总量要求相对较低,对于组织本身蛋白量不高,可以选择Label-Free,适用于一些难收集样品;(5)定性没有问题,但是定量的准确性较标记定量稍差,会受到质谱稳定性等因素的影响;(6)适合于大样本量的定量比较(大于24个样本)。蛋白质组学在医学的研究应用:蛋白质组学(Proteomics)是研究细胞、组织或生物体中蛋白质组成、定位、变化及其相互作用规律的科学。蛋白质组意指“一种基因组所表达的全套蛋白质”,即包括一种细胞乃至一种生物所表达的全部蛋白质。
定量蛋白质组学分析:特点:(1)不同样本标记之后混样,统一处理上机,减少了分别上机造成的实验误差,并利用同位素标签的丰度来检测,定量更准确,重复性更好;(2)由于需要标记试剂标记,因此成本相对较高;(3)通量高,在一次实验中比较多可同时比较8个样品;(4)利用基于同一个参考样品的办法,可以进行多于8个样品的定量比较;(5)iTRAQ的覆盖度高、灵敏度高。Label-Free定量蛋白质组学分析:Label-Free定量,即非标记的定量蛋白质组学,不需要对比较样本做特定标记处理,只需要比较特定肽段/蛋白在不同样品间的色谱质谱响应信号便可得到样品间蛋白表达量的变化,通常用于分析大规模蛋白鉴定和定量时所产生的质谱数据。蛋白质组学技术有飞行时间质谱。南京定量N糖基化蛋白质组学方法
蛋白质组学与其它学科的交叉也将日益明显和重要。济南定量N糖基化蛋白质组学分析方法
定量蛋白质组学方法学介绍:iTRAQ:iTRAQ定量是目前定量蛋白质组学应用比较普遍的技术,该技术的关键原理是多肽标记和定量,将多肽的含量转化为114、115、116和117同位素的含量(或113、114、115、116、117、118、119和121的8标记),从而简化了定量的复杂性,然后通过多肽定量值回归到蛋白的定量值,从而测定出不同样本之间蛋白质的差异。iTRAQ定量不依赖样本,可检测出较低丰度蛋白,胞浆蛋白、膜蛋白、胞外蛋白等,且定量准确,可同时对8个样本进行分析,并可同时得出鉴定和定量的结果,特别适用于采用多种处理方式或来自多个处理时间的样本的差异蛋白分析。济南定量N糖基化蛋白质组学分析方法
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