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武汉蛋白质糖基化修饰组学质谱分析

来源: 发布时间:2022-01-08

什么是蛋白质的翻译后修饰?蛋白质的翻译后修饰()是指蛋白质在翻译后的化学修饰。对于大部分的蛋白质来说,这是蛋白质生物合成的较后步骤。PTM是细胞信号传导中的重要组成部分。通过向修饰基团添加一个或多个氨基酸残基或通过蛋白质水解切割该基团来改变蛋白质的性质,是蛋白质生物学功能表达的重要步骤。生物蛋白质的翻译后修饰极大地增加了蛋白质结构的类型和功能。这个过程调节细胞周期和蛋白质转录,并影响表观遗传学。蛋白质的磷酸化修饰是生物体内重要的共价修饰方式之一。武汉蛋白质糖基化修饰组学质谱分析

蛋白质翻译后修饰组学:血浆蛋白糖基化修饰分析:蛋白质糖基化指碳水化合物通过共翻译或翻译后修饰的方式附着到蛋白质上的过程,是一种常见的蛋白质翻译后修饰。分泌的细胞外蛋白常被糖基化,糖基化蛋白通常是重要的整合膜蛋白。血浆中的蛋白质包括维持机体正常生理状态的蛋白质和机体分泌、渗漏、脱落的蛋白质,其中不乏存在一些糖基化蛋白质。而蛋白质糖基化修饰不只影响蛋白质的空间构象、生物活性、运输和定位,而且在分子识别、细胞通信、信号转导等特定生物过程中发挥着至关重要的作用。因此对血浆蛋白糖基化进行分析,有助于研究血浆蛋白的生理功能等。武汉磷酸化修饰蛋白质组学费用目前对乙酰化修饰的功能研究主要集中在对细胞转录调控,以及对代谢通路的调控这两个方面。

蛋白质学组翻译后修饰分析自中而下分析策略:自中而下的蛋白质组学技术可用于组蛋白修饰的分析。样品制备与普遍使用的自下而上的分析策略相同,直到得到纯化的组蛋白。提取组蛋白后,用GluC进行消化。然后用弱阳离子交换/亲水相互作用色谱(WCX-HILIC)与配备电子转移解离(ETD)的高分辨率质谱联机联用,对样品进行理想的分离。谱识别可以用传统的软件进行,但是由于估计适当的错误发现率的问题,需要对结果进行过滤。自上而下的技术可以直接引入完整的蛋白质并在串联质谱仪上对其进行片段化,不需要蛋白质水解消化。目前,有两种完全分离蛋白质的方法:离线和在线。前者用四维分离法,后者用WCX-HILIC。

蛋白质学组翻译后修饰的研究策略:目前,有几种分析蛋白质翻译后修饰的策略,包括质谱(MS)、Eastern blotting、放射性标记和Western blotting。放射性标记和Western blotting是比较传统、特异性和相对定量的方法。该过程需要事先知道翻译后修饰类型。局限性包括抗体的特异性和可用性。质谱技术也常被用于翻译后修饰分析,不受修饰类型和相关修饰位点的现有知识的限制。自下而上:自下而上的技术是蛋白质组学研究中使用的质谱策略之一。在根据序列鉴定肽之前,需要使用蛋白酶消化蛋白质。由于该技术不能保证在检测过程中被检测肽的完整性和稳定性,因此无法获得不同蛋白质翻译后修饰之间关系的信息,这意味着它无法检测到某些修饰。因此,该方法不适用于分析组蛋白的组合翻译后修饰。自中而下的蛋白质组学技术可用于组蛋白修饰的分析。

蛋白质修饰位点分析:基于LC-MS/MS分析能够精确测定蛋白质或多肽分子质量这一特性,从而检测蛋白质或者多肽上位点发生何种修饰。可检测修饰类型如下: 磷酸化、糖基化、乙?;?、泛素化、丙酰化、丁?;?、丙二?;⑽於;?、琥珀?;?、单甲基化、二甲基化、三甲基化。1、磷酸化:信号转导、细胞周期、生长发育机理等;2、糖基化:蛋白质折叠、更新以及免疫应答等;3、乙?;夯虮泶锏骺?、细胞凋亡、细胞代谢、蛋白质稳定性以及神经退行性的病变等;4、泛素化:细胞周期、细胞凋亡、转录调控、DNA修复以及信号转导等;5、甲基化:染色质结构及转录调控等;6、丙?;?/ 丙二?;?/ 戊二?;?/ 琥珀酰化:主要存在于线粒体和细菌中,与代谢过程密切相关。蛋白质翻译后修饰是指对翻译后的蛋白质进行共价加工的过程。江苏蛋白质糖基化修饰组学类型

蛋白磷酸化修饰过程是通过蛋白激酶催化,将磷酸基团从ATP转移到多肽底物的丝氨酸、或酪氨酸残基上。武汉蛋白质糖基化修饰组学质谱分析

翻译后修饰蛋白组学分析:在蛋白翻译后修饰方式的鉴定过程中,蛋白会首先被酶切成肽段,然后进入质谱进行分析。通过质谱分析,得到的是一系列肽段的分子质量信息。对于某一个特定肽段而言,在没有发生任何翻译后修饰的情况下,其序列信息和分子量是确定的。当它发生了某种翻译后修饰之后,例如磷酸化修饰,由于序列信息和分子量是确定的,磷酸根的分子量也是确定的。在质谱检测过程中发现其中的部分肽段的分子量刚好增加了一个磷酸根的分子量,假设这个肽段就发生了磷酸化修饰,再通过二级质谱图进行二次确认。武汉蛋白质糖基化修饰组学质谱分析

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