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济南IncRNA转录组学定性分析

来源: 发布时间:2022-01-07

转录组学,基因组学,蛋白质组学的区别:蛋白组学针对的是全体蛋白,组要以2D-Gel和质谱为主,分为top-down和bottom-up分析方法。理念和基因组类似,将蛋白用特定的物料化学手段分解成小肽段,在通过质量反推蛋白序列,之后进行搜索,标识已知未知的蛋白序列。转录组学研究的是某个时间点的mRNA总和,可以用芯片,也可以用测序。芯片是用已知的基因探针,测序则有可能发现新的mRNA。基因组学研究的主要是基因组DNA,使用方法目前以二代测序为主,将基因组拆成小片段后再用生物信息学算法进行迭代组装。当然这只是第1步,随后还有繁琐的基因注释等数据分析工作。转录组学检测范围广,高于6个数量级的动态检测范围。济南IncRNA转录组学定性分析

单细胞转录组学技术:10×genomics技术:首先在凝胶微珠上种上特定的DNA的片段,DNA的片段由三部分组成:Barcode、UMI、PolyT组成。Barcode是16个碱基的长度。一共有400万种Barcode,一个微珠是对应于一种Barcode,通过这400万种Barcode,可以把凝胶微珠给区分开(通过barcode可以把cell分开)。UMI是一段随机序列,也就是说每一个DNA分子,都有自己的UMI序列(一个微珠上有很多种UMI,通过UMI可以把RNA分子分开,并可以标记RNA分子的数量)。10个碱基长的UMI,有100万种序列的变化(4^10=1,048,576),UMI的作用是为了区分哪些reads是来自于一个原始cDNA分子区分基因片段重复还是duplication及区分是真实的SNP位点还是PCR产生的突变。通过10×genomics仪器将单个细胞与单个凝胶微珠通过油相混在一起,形成油包水的小微滴。湖北高通量转录组学研究转录组学测序比其他研究方法有哪些优势?

转录组学测序比其他研究方法有哪些优势?转录组学测序具有以下优势:(1)可以直接测定每个转录本片段序列、单核苷酸分辨率的准确度,同时不存在传统微阵列杂交的荧光模拟信号带来的交叉反应和背景噪音问题;(2)灵敏度高,可以检测细胞中少至几个拷贝的稀有转录本;(3)可以对任意物种进行全基因组分析,无需预先设计特异性探针,因此无需了解物种基因信息,能够直接对任何物种进行转录组分析,同时能够检测未知基因,发现新的转录本,并准确地识别可变剪切位点及cSNP,UTR区域。(4)检测范围广,高于6个数量级的动态检测范围,能够同时鉴定和定量稀有转录本和正常转录本。

circRNA转录组学成环机制:circRNA环化方式分为内含子环化和外显子环化。目前主流的成环机制可归类为:依赖于剪切体的索尾插接环化。在mRNA前体上,通过连续的组装小核核糖体蛋白从而催化外显子下游的5′供体的位点连接到上游的3′受体的位点,索尾插接形成环化,然后通过剪切形成circRNA。顺式作用元件促进circRNA形成。部分circRNA外显子两侧的内含子中含有反向互补序列,首先在剪切位点上并排形成RNA双链体,再通过可变剪切形成带内含子和不带内含子两种不同的circRNA。或者外显子内部以及两侧的内含子可以竞争进行RNA配对,然后通过可变剪切形成不同类型的circRNA。什么是转录组学测序?

转录组分析是目前应用比较广的高通量测序分析技术之一。常见设计是不同样品之间比较,寻找差异基因、标志基因、协同变化基因、差异剪接和新转录本,并进行结果可视化、功能注释和网络分析等。转录组的测序分析也相对成熟,从RNA提取、构建文库、上机测序再到结果解析既可以自己完成,又可以在专业公司进行。概括来看转录组的分析流程比较简单,序列比对-转录本拼接(可选)-表达定量-差异基因-功能富集-定制分析。整个环节清晰流畅,可以作为刚开始接触高通量测序学习比较合适的技术之一。转录组学无需预先设计特异性探针。上海circ RNA转录组学服务

转录组学可应用于表达差异的研究。济南IncRNA转录组学定性分析

什么是转录组学测序?转录组广义上指在某一生理条件下,细胞内所有转录组产物的组合,包括:mRNA、ncRNA、rRNA等;狭义上指所有mRNA的组合。转录组测序的研究对象为特定细胞在某一功能状态下所能转录出来的所有RNA的总和,主要包括mRNA和ncRNA。转录组具有时间特异性、组织特异性、空间特异性等特点。无参转录组和有参转录组的区别?如果所研究的物种有组装注释质量较好基因组序列,且和该基因组序列比对效率较高,那么可以采用有参转录组的分析策略,直接进行分析。反之,则需要按照无参转录组的分析策略进行转录本组装,构建unigene库,然后进行后续分析。济南IncRNA转录组学定性分析

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