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杭州RNA转录组学技术服务

来源: 发布时间:2022-01-05

转录组学应用于胃肠瘤转移机制研究:circRNA是一种非编码RNA,可以多种方式参与生物学功能,如细胞增殖、细胞周期、侵袭和转移等。近年来研究发现,环状RNA可以通过海绵吸附微小RNA和RNA结合蛋白参与转录后调控,从而影响瘤耐药过程中的DNA修复、凋亡、增殖、细胞转运,以及介导瘤耐药的细胞内酶,进而在瘤耐药中发挥重要调节作用。有研究证实通过干扰环状RNA的表达,可以提高瘤对药物的敏感性,提示环状RNA可能为抗瘤药物耐药性的研究提供新的靶点。普通转录组测序主要适用于不同的环境、药物、病原菌等逆境胁迫处理。杭州RNA转录组学技术服务

转录组学和基因组学目前有实用价值吗?二者实用价值非常大,尤其是对有瘤的患者的医治,简直颠覆了传统医治的模式。转录组和基因组月在生物学研究中有着重要价值。例如研究某个基因功能的时候,可以构建该基因的敲除或者过表达生物,然后对比野生型进行转录组分析看看该基因涉及什么表达网络。此外在医学方面的应用也很大,例如在有的瘤病人中进行基因组学测序和分析能够了解其中的发生的发展的驱动基因,然后能根据发展的驱动基因研究靶向药物,从而推动瘤的药物研发和医治!贵阳SmalIRNA转录组学方法转录学组测序可对任意物种的整体转录活动进行检测。

单细胞转录组学技术:Anydeplete技术首先通过随机引物进行一链合成,一链合成引入核苷酸类似物,用于酶切打断,二链合成同样引入核苷酸类似物用于保证链特异性。然后两端加上接头,接头一条链也带有核苷酸类似物,用于酶切降解。当形成单链文库后,设计特异性引物与rRNA形成文库结合,一轮退火延伸,rRNA文库形成双链结构。Reverseadaptor上带有特异的酶切位点,当形成双链结构酶切位点被识别,切去接头,这样rRNA形成的文库不带有完整的接头,而其他文库带有完整接头,通过PCR扩增富积既能得到想要的信息,包含mRNA及LncRNA信息。同样Anydeplete技术与10×genomics技术一样,包含分子标签,可分析duplication及PCR产生突变位点。

全长转录组学测序:由于在转录组研究中通常所使用的第二代测序技术具有测序读长的限制,因此在进行测序之前,需要先将样本的mRNA打碎为小片段,之后再通过与参考基因组比对或拼接的方式识别转录本,这就会造成一定的错误比例,同时在也很难区分单碱基水平的差异。全长转录组测序的优势:1、全方面鉴定可变剪切;2、发现更多新基因;3、有效改善基因组注释;4、鉴定更多的LncRNA;5、准确定位融合基因。研究思路:由于全长转录组测序是基于第三代测序技术,因而其成本依然较高,如果全部研究项目均基于全长转录组,通常来说很难承担,因此,全长转录组测序一般与普通转录组测序相结合。转录组学可以直接测定每个转录本片段序列。

转录组学测序结果的影响因素?RNA的降解严重影响测序的质量,RNA降解后,加入poly-A后无法捕获纯化mRNA,因此,随机引物反转录无法得到全部的cDNA,导致测序结果出现明显的3‘-和5’-偏向。文库中的poly-A多聚物的存在会对测序信号产生干扰,影响测序结果的准确性;同时由于转录组中转录本的丰度不一致,实验前需要对样本进行均一化处理,否则高丰度的表达基因会掩盖低丰度表达基因,导致寻找新基因失败或者是获得大量无意义的重复序列。转录组学可以在单核苷酸水平对任意物种的整体转录活动进行检测。武汉circ RNA转录组学分析

转录组学可应用于表达差异的研究。杭州RNA转录组学技术服务

单细胞转录组学测试步骤:第1步就是把单个细胞分选出来。分选的方式也比较多,物理切割,酶消化,FACS分选等。假如已经分到了一个单细胞,跟常规的转录组步骤上是一样的。下一步就是把单细胞里的RNA提取出来去建库测序。但是一个细胞里的RNA含量是比较少的,难建库成功。这个里面“量”的概念很有意思。比如说单细胞量少,需要特殊处理。因为单细胞里面RNA的量少,所以说整个富集的过程中会出现一部分基因在一个细胞里能检测到,在另外一个细胞里面检测不到,而每个细胞里面的检测存在一个随机性,同时单细胞测序深度比较低,所以说分析时相比于普通转录组有一些是需要特别注意,但整体的分析思路是类似的。杭州RNA转录组学技术服务

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