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上海外泌体蛋白质组学

来源: 发布时间:2022-01-03

蛋白质组学技术:电喷雾质谱:ESI-MS是利用高电场使质谱进样端的毛细管柱流出的液滴带电,在N2气流的作用下,液滴溶剂蒸发,表面积缩小,表面电荷密度不断增加,直至产生的库仑力与液滴表面张力达到雷利极限,液滴爆裂为带电的子液滴,这一过程不断重复使液滴非常细小呈喷雾状,这时液滴表面的电场非常强大,使分析物离子化并以带单电荷或多电荷的离子形式进入质量分析器。ESI-MS从液相中产生离子,一般说来,肽段的混合物经过液相色谱分离后,经过偶联的与在线连接的离子阱质谱分析,给出肽片段的精确的氨基酸序列,但是分析时间一般较长。目前,许多实验室两种质谱方法连用,获得有意义的蛋白质的肽段序列,设计探针或引物来获得有意义的基因。随着蛋白质组研究的深入,又有多种新型质谱仪出现,主要是在上述质谱仪的基础上进行改进与重新组合。对人类而言,蛋白质组学的研究终究要服务于人类的健康。上海外泌体蛋白质组学

蛋白质组学是以蛋白质组为研究对象,研究细胞、组织或生物体蛋白质组成及其变化规律的科学。蛋白质组学研究不只是探索生命奥秘的必须工作,也能为人类健康事业带来巨大的利益,是生命科学进入后基因时代的特征。蛋白质是生命存在和运动的物质基础,是细胞增殖、分化、衰老和凋亡等重大生命活动的执行者,亦是基因功能活动的执行者,是生命现象复杂性和多变性的直接体现者。蛋白质组研究是为了识别及鉴定一个细胞或组织所表达的全部蛋白质以及它们的表达模式,是对基因组研究的重要补充,是对生物体在蛋白质水平上定量、动态、整体性的研究。这类研究有助于了解蛋白的结构、细胞的功能、生命的本质及活动规律,为疾病的诊断、诊疗、疫苗及新药开发提供科学依据。上海TMT/iTRAQ标记定量蛋白质组学报价在当前的生物医学研究和临床诊断中,蛋白质组学相关技术有非常多的应用。

Labelfree非标记定量蛋白质组学技术特点:(1)不需要标记处理,操作简单,成本低、实验周期短;(2)每个样品单独处理、上机;(3)可以做任意样本的总蛋白质差异定量,样品类型不受限制;(4)对单个样品的蛋白总量要求相对较低,对于组织本身蛋白量不高,可以选择Label-Free,适用于一些难收集样品;(5)定性没有问题,但是定量的准确性较标记定量稍差,会受到质谱稳定性等因素的影响;(6)适合于大样本量的定量比较(大于24个样本)。蛋白质组学在医学的研究应用:蛋白质组学(Proteomics)是研究细胞、组织或生物体中蛋白质组成、定位、变化及其相互作用规律的科学。

非标定量法(Label-free)是通过比较质谱分析次数或质谱峰强度,分析不同来源样品蛋白的数量变化,认为肽段在质谱中被捕获检测的频率与其在混合物中的丰度成正相关,因此蛋白质被质谱检测的计数反映了蛋白质的丰度,通过适当的数学公式可以将质谱检测计数与蛋白质的量联系起来,从而对蛋白质进行定量。按照其原理主要分为两种,第1种spectrumcounts类的非标记方法,发展比较早,已经形成多种定量算法,但是主要的原理都是以MS2的鉴定结果为定量基础,各种方法的差别在于后期算法在大规模数据上的修正。第二种非标记定量的原理是以MS1为基础,计算每个肽段的信号强度在LC-MS上的积分。蛋白质组学与其它学科的交叉也将日益明显和重要。

定量蛋白质组学技术:定量蛋白质组学技术主要分为标记(label)和非标记(labelfree)定量策略,标记策略又分为体内标记和体外标记两种。细胞内蛋白质组丰度的动态变化对各种生命过程有重要影响。例如在许多疾病的发生和发展进程中,常常伴随着某些蛋白质的表达异常。定量蛋白质组学就是把一个基因组表达的全部蛋白质或一个复杂的混合体系中所有的蛋白质进行精确的定量和鉴定。非标记(labelfree)的定量蛋白组学技术,Labelfree定量蛋白组学技术是通过液质联用技术对蛋白质酶解肽段进行质谱分析,无需使用昂贵的稳定同位素标签做内部标准,只需分析大规模鉴定蛋白质时所产生的质谱数据,比较不同样品中相应肽段的信号强度,从而对肽段对应的蛋白质进行相对定量。在对早老性痴呆等人类重大疾病的临床诊断和治理方面蛋白质组技术也有十分诱人的前景。蛋白质组学研究

通过对正常个体及病理个体间的蛋白质组比较分析,我们可以找到某些“疾病特异性的蛋白质分子”。上海外泌体蛋白质组学

我们究竟怎么研究蛋白质组学呢?抗体免疫的方法呢,其实就是ELISA,Western及蛋白质芯片。通过合成大量蛋白质特异的抗体,能够进行定性检测及相对定量分析,只要你有好用的抗体,那么就可以通过免疫反应让抗体快速的识别你感兴趣的蛋白质,然后用例如HRP发光等标记方法显示它们是否存在于你的样品当中。现在已有的抗体不只能识别特定蛋白质,还能识别特定修饰的特定蛋白质或者被特定修饰过的特定蛋白质Motif。蛋白质组与基因组相对应,也是一个整体的概念。上海外泌体蛋白质组学

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