蛋白质乙酰化修饰鉴定流程：1. 组织/细胞破碎，提取、提纯目的蛋白质。2. 使用胰蛋白酶将目的蛋白酶解成多肽片段。3. 使用高效特异性乙酰化抗体对乙酰化修饰肽段进行免疫富集。4. 使用LC-MS/MS对富集的乙酰化肽段进行鉴定分析。5. 数据分析，并对鉴定的乙酰化位点的生物学功能进行解释预测。随着蛋白质组研究的发展，我们越来越深刻地意识到，对于生物体生命活动的管理和调控过程，密切相关的不只是单个蛋白质层面的修饰状态，更重要的是研究蛋白质组学水平研究在翻译后修饰的动态变化。高质、高效的蛋白质翻译后修饰富集技术和丰富的、准确的定量手段使得研究蛋白质水平的翻译后修饰组学成为现实，借助这些组学研究手段能够实现不同生理病理状态下生物样本在翻译后修饰水平上的定量比较，深入地揭示翻译后修饰水平的波动与生物生命活动的密切联系。泛素化修饰还可以直接影响蛋白质的活性和定位。江苏氧化修饰蛋白质组学服务

蛋白磷酸化检测方法：一、Western Blot检测方法优势：1. WB方法简便，多数实验室具备Western Blot设备条件。2. 许多磷酸化抗体十分灵敏，能够检测低至10ug的蛋白样品。3. 对于丰度低的蛋白，可以先通过IP使用目标蛋白的抗体对目标蛋白进行富集，再进行WB检测被磷酸化的蛋白，检测效率可以提高几倍甚至几十倍。二、质谱检测方法：Western Blot的方法虽然简便，但是对于大规模分析复杂的生物样品的磷酸化水平就不再适用了。而质谱却能很好的解决这一问题。依靠高准确度质谱仪，如今快速准确分析细胞中高丰度蛋白的磷酸化修饰已是非常简单的事。具体的检测方法为先通过SDS-PAGE胶，或者2D-PAGE胶等分离目标蛋白，将含有目标蛋白的条带切下，胰酶消化，LC-MS/MS检测分析蛋白序列和相应位点的磷酸化修饰。这个方法适用于同时检测多个目标蛋白的磷酸化水平。广州丙酰化修饰蛋白质组学质谱鉴定在众多乙酰化修饰的蛋白质中，研究较多的要数细胞核中包围DNA的组蛋白了。

蛋白质乙酰化修饰组学技术：乙酰化修饰是体内保守的可逆转的蛋白修饰，对细胞核内转录调控因子的刺激有着重要的作用。此外，还存在的非组蛋白乙酰化修饰参与了代谢通路及代谢酶活性的调节。采用肽段预分离降低高丰度组蛋白对蛋白乙酰化鉴定的影响，再结合免疫共沉淀通过抗体富集乙酰化的肽段，从而实现乙酰化的鉴定及定量。样品要求：1、SDS-PAGE条带：5个以上可见考染条带。2、溶液（目标蛋白质）：目标蛋白总量>50μg，目标蛋白浓度>80%。3、溶液（大规模混合蛋白质）：蛋白总量>1mg，蛋白浓度>1μg/μl。

蛋白质学组翻译后修饰的类型：翻译后修饰的类型包括N端fMet或Met的去除、二硫键的形成、化学修饰和肽键的裂解，其中磷酸化是比较常见的。蛋白质的化学修饰反应是在维持蛋白质的完整性和功能性的基础上，通过基于其氨基酸残基的化学反应获得新的生物结合物。翻译后修饰在哪里发生？翻译后修饰主要发生在氨基酸侧链或蛋白质的C端或N端。现有的官能团或新官能团的引入可被用于修饰蛋白质，以扩展20个标准氨基酸的化学组成。翻译后修饰的位点通常带有可以在化学反应中充当亲核试剂的官能团，如丝氨酸、苏氨酸和酪氨酸的羟基；赖氨酸、精氨酸和组氨酸胺形式；同时，在蛋白质的N端和C端，天冬酰胺也可作为翻译后修饰中的一种聚糖连接点。翻译后修饰也发生在氧化的蛋氨酸和侧链位点的一些亚甲基上。蛋白质修饰可检测修饰类型有磷酸化、糖基化、乙酰化、泛素化、丙酰化、丁酰化、丙二酰化。

质谱分析蛋白翻译后修饰原理：相较于没有发生翻译后修饰的蛋白，翻译后修饰蛋白会在特定肽段序列有分子量的增加。在蛋白翻译后修饰方式的质谱分析过程中，蛋白会首先被酶切成肽段，然后进入质谱进行分析；通过质谱分析，得到的是一系列肽段的相对分子质量信息。对于某一个特定的肽段而言，在没有发生任何翻译后修饰的情况下其序列信息和分子量是确定的，当它发生了某种翻译后修饰之后，例如磷酸化修饰，因为磷酸根的分子量也是确定的，所以在质谱检测过程中如果发现部分肽段的分子量刚好增加了一个磷酸根的分子量，则可以假设这个肽段发生了磷酸化修饰，再通过二级或多级质谱的谱图进行二次确认即可实现翻译后修饰类型鉴定及修饰位点分析等。蛋白质翻译后修饰的作用主要是改变蛋白质的定位。广州蛋白质亚硝基化修饰组学质谱分析

蛋白质磷酸化修饰的免疫印迹技术优点：能够特异鉴定单个磷酸化位点。江苏氧化修饰蛋白质组学服务

翻译后修饰蛋白组学分析：在蛋白翻译后修饰方式的鉴定过程中，蛋白会首先被酶切成肽段，然后进入质谱进行分析。通过质谱分析，得到的是一系列肽段的分子质量信息。对于某一个特定肽段而言，在没有发生任何翻译后修饰的情况下，其序列信息和分子量是确定的。当它发生了某种翻译后修饰之后，例如磷酸化修饰，由于序列信息和分子量是确定的，磷酸根的分子量也是确定的。在质谱检测过程中发现其中的部分肽段的分子量刚好增加了一个磷酸根的分子量，假设这个肽段就发生了磷酸化修饰，再通过二级质谱图进行二次确认。江苏氧化修饰蛋白质组学服务

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