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广东棕榈酰化修饰蛋白质组学分析方法

来源: 发布时间:2021-12-30

蛋白质-蛋白质相互作用是蛋白质发挥功能的主要机制之一,在DNA损伤修复,自噬和代谢等过程中都扮演着非常重要的角色,蛋白相互作用异常便会导致疾病的发生.在蛋白质的赖氨酸,丝氨酸和苏氨酸等氨基酸残基上,可发生甲基化,乙酰化,磷酸化和泛素化等200多种翻译后修饰,这些修饰通常能改变蛋白质的电性,疏水性和空间结构等属性,为与之结合的蛋白提供结合的锚定或产生位阻效应,像一把开关在时空上精确调控蛋白质-蛋白质相互作用的发生以及动态变化.结构研究表明,蛋白质之间的相互作用通常由临近的几个氨基酸残基直接结合,替换该区域的氨基酸残基,通常能破坏结合,使其失去部分功能或酶活性,可以针对性地开发和设计抑制剂,用于疾病的诊疗。蛋白质翻译后修饰是指对翻译后的蛋白质进行共价加工的过程。广东棕榈酰化修饰蛋白质组学分析方法

质谱分析乙酰化蛋白质组:质谱分析技术可以对蛋白质组中的乙酰化蛋白进行鉴定、乙酰化位点定位以及定量。当质谱用于乙酰化定量蛋白组研究中时,因为乙酰化蛋白质在生物样本中含量低、动态范围广,需要先对乙酰化肽段进行富集,然后再对富集得到的乙酰化肽段样品进行定量分析。质谱定量乙酰化蛋白组采用肽段预分离降低高丰度蛋白的影响,结合免疫共沉淀通过高效的抗体富集乙酰化的肽段,从而实现大规模乙酰化的鉴定及定量。为了鉴定和定量更多的乙酰化肽段,在酶切过程中还可使用多种不同的酶对蛋白样品进行酶切。上海亚硝基化修饰蛋白质组学分析蛋白磷酸化修饰过程是通过蛋白激酶催化,将磷酸基团从ATP转移到多肽底物的丝氨酸、或酪氨酸残基上。

蛋白质翻译后修饰:蛋白质的翻译后修饰通过可逆的共价键将小分子或蛋白质与底物蛋白质上特定的氨基酸结合,调控着底物的酶活性、功能以及三级结构的变化。各种蛋白质翻译后修饰在信号通路和网络中发挥着重要的作用,翻译后修饰系统的紊乱将导致一系列疾病的发生。通过实验的方法鉴定蛋白质翻译后修饰的位点需要耗费大量的资金和时间,并且酶反应的优化常常难以实现。而计算的方法则能够快速、准确的预测酶特异性的底物蛋白质及其修饰位点。

蛋白质泛素化修饰组学技术:泛素化修饰是一种重要的翻译后修饰。泛素-蛋白酶体系统介导了真核生物体内80%~85%的蛋白质降解。此外,泛素化修饰还可以直接影响蛋白质的活性和定位,调控包括细胞周期、细胞凋亡、转录调控、DNA 损伤修复以及免疫应答等在内的多种细胞活动。样品要求:1、SDS-PAGE条带:5个以上可见考染条带。2、溶液(目标蛋白质):目标蛋白总量>50μg,目标蛋白浓度>80%。3、溶液(大规模混合蛋白质):蛋白总量>1mg,蛋白浓度>1μg/μl。蛋白质翻译后修饰的作用主要是改变蛋白质的活性。

翻译后修饰蛋白组:翻译后修饰蛋白组分析是指在组学水平上对存在翻译后修饰的蛋白质进行分析。翻译后修饰蛋白组是指细胞或组织等整体水平上的翻译后修饰蛋白。蛋白质的翻译后修饰(Post Translational Modifications, PTMs)是蛋白质在翻译中或翻译后经历的一个共价加工过程。蛋白翻译后修饰通过在一个或多个氨基酸残基上加修饰基团或通过蛋白质水解去基团而改变蛋白质的性质,调节蛋白质的功能。经过翻译后修饰的蛋白质称为翻译后修饰蛋白。目前,已知的蛋白质翻译后修饰主要包括糖基化、磷酸化、乙酰化、泛素化、二硫键配对、甲基化和亚硝基化等等。乙酰化修饰对细胞核内转录调控因子的刺激有着非常重要的作用。哈尔滨蛋白质丙二酰化修饰组学质谱鉴定

在早期的研究中,乙酰化修饰一直被认为是真核细胞所特有的一种翻译后修饰。广东棕榈酰化修饰蛋白质组学分析方法

蛋白质乙酰化修饰组学定量分析:1. SILAC细胞标记,组织/细胞破碎,提取、提纯目的蛋白质(基于SILAC的乙酰化修饰组学定量)。2. 使用胰蛋白酶将目的蛋白酶解成多肽片段。3. 对多肽片段进行iTRAQ标记(基于iTRAQ的乙酰化修饰组学定量)。4. 使用高效特异性乙酰化抗体对乙酰化修饰肽段进行免疫富集。5. 使用LC-MS/MS对富集的乙酰化肽段进行序列分析。6. 数据分析,比对不同样本中蛋白乙酰化修饰水平差异,并对产生变化的生物学意义进行解释。广东棕榈酰化修饰蛋白质组学分析方法

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