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北京丙二酰化修饰蛋白质组学主要技术

来源: 发布时间:2022-05-29

泛素化修饰蛋白组学研究分析样品要求:1. 如果您提供的是组织样品,请您干冰将组织样品寄给我们;植物组织样本大于400mg,血液样品至少2ml(血浆注意用EDTA防凝),血清2ml,尿液10ml,动物组织样品至少2g,细胞样品为1X10^8个细胞,酵母、微生物等干重400mg。2. 如果您提供的是蛋白样品,请您保证蛋白总量在2-5mg;蛋白提取时使用普通的组织、细胞裂解液即可。3. 样品运输:请使用足量的干冰运输,并且尽量选用较快的邮递方式,以降低运输过程中样品降解的可能性。4. 在正式实验之前,我们都会对您提供的样品进行检测,检测合格后开始正式试验。翻译后修饰是指对翻译后的蛋白质进行共价加工的过程。北京丙二酰化修饰蛋白质组学主要技术

根据不同的作用位点,蛋白质乙酰化修饰分为:发生在蛋白N端的乙酰化修饰、发生在蛋白赖氨酸上的乙酰化修饰。前者发生在90%以上的真核生物新生蛋白上,对于新生蛋白的成熟和细胞定位非常重要,由N乙酰转移酶(NATs)负责;而后者是一个可逆的过程,主要由赖氨酸乙酰化酶(KATs)和赖氨酸去乙酰化酶(KDACs),赖氨酸的乙酰化修饰是我们目前研究的重点。蛋白质磷酸化修饰应用领域:应用在食品工业方面,通过人工翻译磷酸化修饰的蛋白可以普遍用于各种食用蛋白质的改性,以改善蛋白质品质。如,花生蛋白、大豆蛋白、小麦面筋蛋白等。在人工磷酸化修饰的方法下,也可以研究各种蛋白质的功能和相关代谢途径的调控。在医学领域,蛋白质的磷酸化紊乱,会导致细胞周期调控异常,因此,病理的形成与蛋白质的磷酸化异常也有很大相关性。其分子机制问题对于病症等重大疾病的研究具有相当的指导意义,这也是指当之无愧地成为生物学研究领域中的热点。哈尔滨蛋白质甲基化修饰组学价钱乙酰化修饰组学技术服务采用肽段预分离降低高丰度组蛋白对蛋白乙酰化鉴定的影响。

磷酸化修饰蛋白质组学:在有机体内,磷酸化是蛋白翻译后修饰中比较普遍的共价修饰形式,同时也是原核生物和真核生物中比较重要的调控修饰形式。磷酸化对蛋白质功能的正常发挥起着重要的调节作用,该过程是由蛋白质激酶(Kinase)催化的把ATP或GTP的γ位磷酸基转移到底物蛋白质的氨基酸残基,如丝氨酸(Serine,Ser,S)、苏氨酸(Threonine,Thr,T)和酪氨酸(Tyrosine,Tyr,Y)等上的过程,而其逆向过程则是由蛋白质磷酸酶去除相应的磷酸基团。正是这两种酶的相反作用及其中所涉及到的能量消耗与生成使磷酸化成为体内很多生理活动调控的首先选择方式。

蛋白质翻译后修饰:蛋白质翻译后修饰 (Protein translational modifications,PTMs) 通过功能基团或蛋白质的共价添加、调节亚基的蛋白水解切割或整个蛋白质的降解来增加蛋白质组的功能多样性。这些修饰包括磷酸化、糖基化、泛素化、亚硝基化、甲基化、乙酰化、脂质化和蛋白水解,几乎影响正常细胞生物学和发病机制的所有方面。因此,识别和理解 PTM 在细胞生物学和疾病疗理和预防的研究中至关重要。蛋白质翻译后修饰 (PTMs) 进一步促进了从基因组水平到蛋白质组复杂性的增加。PTMs 是一种化学修饰,在功能蛋白质组中发挥关键作用,因为它们调节活性、定位以及与其他细胞分子(如蛋白质、核酸、脂质和辅助因子)的相互作用。翻译后修饰可以发生在蛋白质生命周期的任何阶段。

糖基化修饰蛋白质组学:蛋白质的糖基化具有异质性。不同的糖链可以连接到同一位点上,不同位点可以连接到同一蛋白质上的不同糖链上。糖基化的异质性严重阻碍了糖蛋白的分离和分析。不同糖类型的相同蛋白质,在电泳上会出现分散的条带,导致信号分散。此外,对低丰度蛋白质的识别性差导致糖蛋白在色谱图中分离不佳,质谱中有一簇分子量不准确的分辨不清的峰。目前,蛋白糖基化研究的主要策略是利用现有的技术体系对糖基化蛋白的糖基化肽段进行分离和富集,消除糖基化的异质性及其对质谱的影响,标记糖基化位点。从而实现高通量糖蛋白和糖基化位点的识别。常用的糖蛋白分离和富集技术有:a. 凝集素亲和技术;b. 肼化学富集;c. 亲水性相互作用色谱法;d. β-消除/迈克尔加成反应。基于质谱的糖蛋白鉴定和糖基化位点测定方法有:a. PNGase F酶法;b. Endo H酶法;c. 三氟甲烷磺酸(TFMS)法。已知的蛋白质翻译后修饰种类有20多种。河南蛋白质甲基化修饰组学方法

目前,发现的比较常见的修饰类型是糖基化、泛素化和磷酸化。北京丙二酰化修饰蛋白质组学主要技术

蛋白质乙酰化修饰组学技术服务:乙酰化修饰是体内高度保守的可逆转的蛋白修饰,对细胞核内转录调控因子的刺激有着非常重要的作用。此外,还存在大量的非组蛋白乙酰化修饰参与了代谢通路及代谢酶活性的调节。乙酰化修饰组学技术服务采用肽段预分离降低高丰度组蛋白对蛋白乙酰化鉴定的影响,再结合免疫共沉淀通过高效的抗体富集乙酰化的肽段,从而实现大规模乙酰化的鉴定及定量。蛋白质泛素化修饰组学技术服务:泛素化修饰是一种重要的翻译后修饰。泛素-蛋白酶体系统介导了真核生物体内80%~85%的蛋白质降解。此外,泛素化修饰还可以直接影响蛋白质的活性和定位,调控包括细胞周期、细胞凋亡、转录调控、DNA 损伤修复以及免疫应答等在内的多种细胞活动。北京丙二酰化修饰蛋白质组学主要技术

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