代谢组学适用范围:1、体液:血清、血浆、尿液、唾液、膝盖滑液、脑脊液、卵泡液、牛奶、痰液、舌苔液、胆汁等。2、组织:各种动物组织和植物组织。3、细胞:细胞及细胞培养液等。3、微生物:大肠杆菌、链球菌等。4、其他:粪便、食糜、肠道内容物等。应用领域:1、非靶向代谢物组学结果的验证。2、代谢相关生理、病理研究。3、发酵工艺研究。4、食品科学与营养学研究。非靶向代谢组学分析内容:非靶向代谢组学分析内容大致包括数据的预处理(包括质谱峰提取和质谱峰校正)-数据质控(包括t-检验、主成分分析等)--差异代谢物分析(包括聚类分析、通路注释分析、多组学关联分析等)。代谢组学是要涉及研究每一个代谢组分的共性、特性和规律。LC-MS/MS非靶向代谢组学定量分析
代谢组学样本收集植物组织:果实、种子:1)对于含水量高、体积较大的果实(番茄、西瓜、苹果等)需要先将样品分成“均匀”的小块(≈ 200 mg/样本)分装至2 mL离心管中,标号后迅速放入液氮中冷冻处理至少15 min。2)对于细小的颗粒种子(拟南芥种子、谷物种子等),可以先将同一组的植株种子混匀后再分装(≈ 200 mg/样本)至离心管中,标号后迅速放入液氮中冷冻处理至少15 min。3)对于要求对整个果实进行提取的(整粒葡萄等),需要把果实装在50 mL离心管/自封袋中,标号后迅速放入液氮中冷冻处理至少15min,-80 ℃冻存,干冰寄送。LC-MS/MS非靶向代谢组学定量分析代谢组学的概念来源于代谢组,代谢组是指某一生物或细胞在一特定生理时期内所有的低分子量代谢产物。
代谢组学研究方法: 对于代谢产物来说,不只只有质谱峰这个特征。更进一步说,质谱(MS)并不能检测出所有的代谢产物,并不是因为质谱的灵敏度不够,而是由于质谱只能检测离子化的物质,但有些代谢产物在质谱仪中不能被离子化。采用核磁共振(NMR)的方法,可以弥补色谱的不足。过去,只有毒理学方面的研究使用核磁共振,而质谱只在植物代谢研究中采用。如今,这两种方法在代谢组学研究中已经普遍使用。为在不同样品间进行有意义的比较,研究人员必须结合使用这两种方法获得的大量数据进行分析。此外,还需要结合基因组学研究获得的数据。
代谢组学尿液样本收集:1)取空腹晨尿、中段尿(临床)或晨间1 h尿(动物)于50 mL离心管中;2)4 ℃ 下10000 rpm离心10 min取上清,用1.5 mL离心管分装,保存于-80 ℃。3)动物1 h尿量不够的情况下,可分多次收集尿液;如需收取24 h尿液,需要使用带低温装置的代谢笼收集,并且及时冻存样本。4)收集完尿液样本后,建议使用液氮淬灭15 min后,再分装多管后于-80 ℃冻存。组织样本收集:动物组织(包括脑、心、肝、脾、肺、肾、肌肉和皮肤等;软体动物如血吸虫):1)取适量组织,用预冷的PBS缓冲液或生理盐水清洗干净;2)迅速剥去非必需的脂肪和结缔组织,再用PBS缓冲液或生理盐水冲洗干净;3)用干净的无尘吸水纸吸干水分,将组织分成50-100 mg / 管分装待用;4)管子上做好标记后迅速放入液氮中冷冻处理至少15 min,-80 ℃冻存;干冰运输。代谢组学是一个相当有效率的研究工具。
代谢组学可以检测的样品种类有哪些?代谢组学主要研究的是作为各种代谢路径的底物和产物的小分子代谢物(分子量<1000)。其样品主要是血浆或血清,尿液,唾液,以及细胞和组织的提取液。我们也和一些公司或单位(如茶叶公司、制酒公司、酸奶公司、医院等)合作,做过植物,微生物提取物,脑脊液,昆虫血淋巴,羊水,卵泡液,膝盖滑液,眼泪,胎盘,粪便及肠道内容物提取液等。一般代谢组学能检测出多少物质?不同的质谱平台灵敏度及偏向性都不一样,而且不同平台之间具有互补性。一般来说GC/MS检测血清样品能准确定性的物质约200个左右,检测尿液样品定性的物质约200个左右,其他样品(如肝脏,粪便,肠道内容物)也在几百这个数量级。代谢组学可以检测的样品种类有哪些?LC-MS/MS非靶向代谢组学定量分析
代谢组学效仿了基因组学和蛋白质组学的研究思想。LC-MS/MS非靶向代谢组学定量分析
代谢组学的研究分为靶向和非靶向。通俗说就是你有没有目标分子。传统代谢组学研究利用的是GC-MS,因为代谢物大多数都不是高沸点的,而且GC-MS有庞大的数据库检索。然后发展的LC-MS差不多,就是克服了一些高沸点物质难以检测的弊端。NMR用于代谢组学不是很多,一方面是NMR这个东西入行起点有点高,另一方面是样品太复杂而且灵敏度不高。但是NMR样品处理简单,无损。不需要各种衍生化。而且NMR对于物质结构的指认要比MS更精确(比如异构体)因此对定性非常有用,成为非靶向代谢组学的重要方法。LC-MS/MS非靶向代谢组学定量分析