蛋白质组学植物篇样品寄样要求:植物相较于动物,蛋白占比不高,所以送样在量上面的要求会多一些,推荐送500mg以上的量可以确保实验能够提取到充足的蛋白。如果是种仁、豆类等蛋白含量比较高的,200mg足以完成抽提。处理样本需要用PBS将样本表面的泥土等杂质冲洗干净,去除掉多余的组织。尽量能够保证样本的形态和纯度,不推荐用锡纸包裹,放在EP管中使其形态完整为比较好。用液氮急速冷冻5min后置于-80℃环境中保存,送样时需要添加干冰。蛋白质组学包括蛋白与蛋白相互作用等。北京PRM定量蛋白质组学服务
蛋白质组学在医学的研究应用:蛋白质组学(Proteomics)是研究细胞、组织或生物体中蛋白质组成、定位、变化及其相互作用规律的科学。labelfree-非标定量法分析技术方法:非标定量法[Labelfree]是近年来重要的质谱定量方法,通过比较质谱分析次数或质谱峰强度,分析不同来源样品蛋白的数量变化。蛋白质非标记定量技术(LabelFree)是通过液质联用技术对蛋白质酶解肽段进行质谱分析,无需使用昂贵的稳定同位素标签做内部标准,只需分析大规模鉴定蛋白质时所产生的质谱数据,比较不同样品中相应肽段的信号强度,从而对肽段对应的蛋白质进行相对定量。河南蛋白质组学研究蛋白质组学与其它学科的交叉也将推动新技术、新方法的发展。
Label Free 非标记定量蛋白质组学技术优点:无需标记,比较大程度的保留样本的真实性;可以区分“有”、“无”蛋白;不受标签数量的限制,多个样本可以同时进行蛋白定量分析;不同物种和不同的样本类型可以同时开展蛋白定量分析;处理步骤简单,成本低。 DIA 定量蛋白质组学:数据非依赖性采集(DIA)是一种明显提升蛋白质组学研究通量和可重复性的技术。经典的 DIA 流程通常依赖于 DDA 谱图库的构建,需要消耗大量的样品,且周期长,成本高。越来越多的不依赖于 DDA 建库的分析方法相继诞生。
蛋白质组学主要以全蛋白组(组织、细胞)、线粒体蛋白组、叶绿体蛋白组和外泌体蛋白组为研究对象,通过对蛋白组进行定性、定量、分子功能分析、通路互作分析和蛋白互作分析,揭示生物学功能、作用机制、疾病诊断的标志物以及预测蛋白的上、下游变化关系。蛋白质组学可以克服核酸水平预测的不确定性、反映核酸翻译后修饰情况。常用技术:非靶向蛋白组学:蛋白质定性(胶条鉴定和溶液鉴定),高通量定量蛋白组(Labelfree、iTRAQ/TMT和DIA定量),多肽组学。蛋白质组的复杂性也远远高于基因组,这是因为一个基因≠一个转录产物≠一个蛋白质。
定量蛋白质组学技术:定量蛋白质组学是蛋白质组研究的重要内容,通过对基因表达产物——蛋白质的定量分析,以了解基因在不同的生理、病理和逆境条件下的表达情况。近年来,随着非凝胶技术的发展,蛋白质组学(“Shotgun”proteomics)技术,特别是多维蛋白质鉴定(MultidimensionalProteinIdentification,MudPIT)已成为研究复杂生物样本中大规模蛋白质表达和定性和定量分析的强有力工具。蛋白质组学在医学的研究应用:蛋白质组学是研究细胞、组织或生物体中蛋白质组成、定位、变化及其相互作用规律的科学。蛋白质组学可以通过系统性地研究蛋白质表达和翻译后修饰变化对疾病的影响。北京PRM定量蛋白质组学服务
蛋白质组研究不只可以实现与基因组的关联,揭示生命活动的发生规律。北京PRM定量蛋白质组学服务
iTRAQ/TMT标记定量蛋白质组介绍:iTRAQ/TMT标记定量蛋白质组研究是对一个基因组表达的全部蛋白质或一个复杂混合体系内所有蛋白质进行标记,利用标记试剂中的二级报告离子来对蛋白进行精确鉴定和定量。技术优势:1、适用范围广:可检测到的蛋白除了胞浆蛋白外,还有线粒体蛋白、膜蛋白。也能对任何类型的蛋白质进行鉴定,包括高分子量,酸性,碱性蛋白质;2、高通量:一次可以实现多个样品的定性定量分析,特别适用于采用多种处理方式或来自多个处理时间的样本的差异蛋白分析。北京PRM定量蛋白质组学服务