蛋白质组学研究这样做:蛋白质组与基因组相对应,也是一个整体的概念,随着基因组学研究的不断深入,蛋白质组学已逐渐成为研究热点,对蛋白组学的研究可以使我们更容易接近生命的机理本质,但探究成千上万的蛋白质特性也是一个重大的技术挑战。蛋白质组(Proteome)指的是某一时刻或某一状态基因组表达的所有相应的蛋白,即细胞、组织或机体全部蛋白质的存在及活动形式,其是一个动态概念,它是在组织、细胞的整体蛋白质水平上,探索蛋白质作用模式、功能机理、调节控制以及蛋白质群体内的相互关系、从而获得生命活动调控网络的全方面而深入的认识,以揭示生命活动的基本规律。蛋白质组研究技术在研究对象上,覆盖了原核微生物、真核微生物、植物和动物等范围。南京高通量蛋白质组学分析研究
PRM靶向蛋白质组学:是一种基于Orbitrap为表示的高分辨、高精度质谱的离子监视技术,首先利用四级杆质量分析器的选择能力,用Q1选择目标肽段的母离子,随后在collisioncell中对母离子进行碎裂,然后利用Orbitrap分析器在二级质谱中检测所选择的母离子窗口内的所有碎片信息。这样能够对目标蛋白质、目标肽段(如发生翻译后修饰的肽段)进行选择性检测,即可对目标蛋白质/肽段进行相对(一定)定量。随着质谱、系统生物学、生物信息学等相关学科的发展,我认为今后我们会更多地在现实生活中见到蛋白质组学相关的应用。如定量胰岛素、鉴定血红蛋白氨基酸突变(镰刀形红细胞症)、糖化血红蛋白比例测定等。从测试体量估计,应该远小于1%的ELISA测试量。武汉医学蛋白质组学价格定量蛋白质组学技术主要分为标记(label)和非标记(label free)定量策略。
Labelfree非标记定量蛋白质组学技术特点:(1)不需要标记处理,操作简单,成本低、实验周期短;(2)每个样品单独处理、上机;(3)可以做任意样本的总蛋白质差异定量,样品类型不受限制;(4)对单个样品的蛋白总量要求相对较低,对于组织本身蛋白量不高,可以选择Label-Free,适用于一些难收集样品;(5)定性没有问题,但是定量的准确性较标记定量稍差,会受到质谱稳定性等因素的影响;(6)适合于大样本量的定量比较(大于24个样本)。蛋白质组学在医学的研究应用:蛋白质组学(Proteomics)是研究细胞、组织或生物体中蛋白质组成、定位、变化及其相互作用规律的科学。
iTRAQ/TMT标记定量蛋白质组介绍:iTRAQ/TMT标记定量蛋白质组研究是对一个基因组表达的全部蛋白质或一个复杂混合体系内所有蛋白质进行标记,利用标记试剂中的二级报告离子来对蛋白进行精确鉴定和定量。技术优势:1、适用范围广:可检测到的蛋白除了胞浆蛋白外,还有线粒体蛋白、膜蛋白。也能对任何类型的蛋白质进行鉴定,包括高分子量,酸性,碱性蛋白质;2、高通量:一次可以实现多个样品的定性定量分析,特别适用于采用多种处理方式或来自多个处理时间的样本的差异蛋白分析。Label Free 非标记定量蛋白质组学技术处理步骤简单,成本低。
蛋白质组学描述: 蛋白质组(proteome):一种细胞、组织或生物体完整基因组所对应的全套蛋白质。蛋白质组学(proteomics):研究细胞、组织或生物体中蛋白质组成、变化、定位及相互作用规律的科学。蛋白质谱技术: 蛋白质谱技术是蛋白质鉴定分析的主要支撑技术,它通过测定样品离子的质荷比(m/z) 来进行成分和结构分析。高灵敏度,精确度;能同时提供样品的精确分子量和结构信息;既可用于定性分析,也可用于定量分析。标记定量技术原理: 在一级质谱图中,任何一种iTRAQ/TMT试剂标记不同样本中的同一蛋白质表现为相同的质荷比; 在二级质谱图中,报告离子表现为不同质荷比的峰,因此根据波峰的高度及面积,可以鉴定出蛋白质和分析出同一蛋白质不同处理的定量信息。蛋白质组学的研究方法将出现多种技术并存。南京PRM靶向定量蛋白质组学价格
蛋白质组学的分析主要指蛋白的生信分析,依赖于数据库的建立。南京高通量蛋白质组学分析研究
常规蛋白质组学:Labelfree多肽组学:顾名思义,就是不使用任何标记方法,直接对肽段进行质谱鉴定和定性定量分析。实验流程简单,只需要对蛋白进行常规酶解和除盐步骤即可上机。定量方式分为两种:峰面积(Peakintensity)和峰计数(Spectralcount),常用的是峰面积。不过,由于质谱采集时只选取topN的母离子进行二级碎裂和MS2检测,所以会丢失一些丰度较低的肽段信息,缺失值比较多。TMT/iTRAQ标记定量蛋白组学:TMT全称是TandemMassTag,是经典化学标记试剂,普遍用于差异表达蛋白质组分析研究中。该技术采用6重、10重或16重同位素标签,与肽段的氨基发生共价结合反应,可实现同时对6个/10个/16个不同样品中蛋白质的定性和定量分析。(目前16标鹿明生物可提供技术服务)。南京高通量蛋白质组学分析研究