PRM靶向定量蛋白质组学实验原理:PRM技术是一种根据已知实测信息或质谱检测规律的假定信息对样品中的蛋白质进行靶向定量的技术。该技术主要应用仪器为Q Exactive系列质谱仪,首先以四极杆作为质量过滤器,特异性地选择与预先设定质荷比相同的肽段离子(母离子)通过,随后在高能碰撞池中碎裂母离子,之后通过Orbitrap分析碎片离子(子离子)得到肽段的二级质谱信息。四极杆的高选择性离子过滤与Orbitrap高分辨率测量技术的结合使得PRM技术有很高的特异性,并且有效的降低了背景噪音,去除了干扰离子,提高了灵敏度。蛋白质组学研究的首要任务是建立获取和分析蛋白质的常规、可靠、有效的技术。贵阳蛋白质组学研究内容
蛋白质组学技术:电喷雾质谱:ESI-MS是利用高电场使质谱进样端的毛细管柱流出的液滴带电,在N2气流的作用下,液滴溶剂蒸发,表面积缩小,表面电荷密度不断增加,直至产生的库仑力与液滴表面张力达到雷利极限,液滴爆裂为带电的子液滴,这一过程不断重复使液滴非常细小呈喷雾状,这时液滴表面的电场非常强大,使分析物离子化并以带单电荷或多电荷的离子形式进入质量分析器。ESI-MS从液相中产生离子,一般说来,肽段的混合物经过液相色谱分离后,经过偶联的与在线连接的离子阱质谱分析,给出肽片段的精确的氨基酸序列,但是分析时间一般较长。目前,许多实验室两种质谱方法连用,获得有意义的蛋白质的肽段序列,设计探针或引物来获得有意义的基因。随着蛋白质组研究的深入,又有多种新型质谱仪出现,主要是在上述质谱仪的基础上进行改进与重新组合。四川新型修饰蛋白组学研究内容蛋白质组学研究策略有什么?
非标定量法(Label-free)是通过比较质谱分析次数或质谱峰强度,分析不同来源样品蛋白的数量变化,认为肽段在质谱中被捕获检测的频率与其在混合物中的丰度成正相关,因此蛋白质被质谱检测的计数反映了蛋白质的丰度,通过适当的数学公式可以将质谱检测计数与蛋白质的量联系起来,从而对蛋白质进行定量。按照其原理主要分为两种,第1种spectrumcounts类的非标记方法,发展比较早,已经形成多种定量算法,但是主要的原理都是以MS2的鉴定结果为定量基础,各种方法的差别在于后期算法在大规模数据上的修正。第二种非标记定量的原理是以MS1为基础,计算每个肽段的信号强度在LC-MS上的积分。
蛋白质组学的介绍:蛋白组学主要以全蛋白组(组织、细胞)、线粒体蛋白组、叶绿体蛋白组和外泌体蛋白组为研究对象,通过对蛋白组进行定性、定量、分子功能分析、通路互作分析和蛋白互作分析,揭示生物学功能、作用机制、疾病诊断的标志物以及预测蛋白的上、下游变化关系。蛋白质组学可以克服核酸水平预测的不确定性、反映核酸翻译后修饰情况。修饰蛋白组学(定量磷酸化修饰组学、定量糖基化修饰蛋白组学、定量乙酰化修饰蛋白组学和定量泛素化修饰蛋白组学)。蛋白质组研究为疾病的诊断、疫苗及新药开发提供科学依据。
蛋白质组(Proteome)的概念指由一个基因组(genome),或一个细胞、组织表达的所有蛋白质(Protein).蛋白质组的概念与基因组的概念有许多差别,它随着组织、甚至环境状态的不同而改变.在转录时,一个基因可以多种mRNA形式剪接,并且,同一蛋白可能以许多形式进行翻译后的修饰.故一个蛋白质组不是一个基因组的直接产物,蛋白质组中蛋白质的数目有时可以超过基因组的数目.蛋白质组学(Proteomics)处于早期“发育”状态,这个领域的**否认它是单纯的方法学,就像基因组学一样,不是一个封闭的、概念化的稳定的知识体系,而是一个领域.蛋白质组学集中于动态描述基因调节,对基因表达的蛋白质水平进行定量的测定,鉴定疾病、药物对生命过程的影响,以及解释基因表达调控的机制.作为一门科学。蛋白质组研究技术涉及到各种重要的生物学现象,如信号转导、细胞分化、蛋白质折叠等。贵州TMT/iTRAQ标记定量蛋白质组学价格
对人类而言,蛋白质组学的研究终究要服务于人类的健康。贵阳蛋白质组学研究内容
DIA 定量蛋白质组学技术优点:采集所有离子及碎片图谱,重现性好。基于碎片离子定量,选择性好,可媲美 SPM/MRM。循环时间固定,扫描点数均匀,定量准确度高。高通量,能同时监测所有目标蛋白。PRM 靶向定量蛋白组:平行反应监测(PRM)是一种靶向检测方法,能够对目标蛋白、目标肽段进行选择性检测,从而实现对目标蛋白/肽段进行相对定量。技术优点:不依赖抗体;特异性;结果准确、可靠;高通量。修饰蛋白质组学:利用 LC-MS/MS 结合数据库检索的方法,在搜库时设置修饰搜库参数,实现对目标所有已知的修饰位点磷酸化、乙酰化、糖基化和泛素化进行鉴定。贵阳蛋白质组学研究内容