代谢组学研究方法:代谢组学的研究方法与蛋白质组学的方法类似,通常有两种方法。一种方法称作代谢物指纹分析 (metabolomic fingerprinting),采用液相色谱-质谱联用(LC-MS)的方法,比较不同血样中各自的代谢产物以确定其中所有的代谢产物。从本质上来说,代谢指纹分析涉及比较不同个体中代谢产物的质谱峰,然后了解不同化合物的结构,建立一套完备的识别这些不同化合物特征的分析方法。另一种方法是代谢轮廓分析(metabolomic profiling),研究人员假定了一条特定的代谢途径,并对此进行更深入的研究。代谢组学的研究处于生物信息流的中游。北京靶向代谢组学服务
非靶向代谢组学:非靶向代谢组学可用于检测生物体内大多数小分子代谢物的动态变化,通过数据处理,多维统计和数学建模来分析生物扰动下的代谢指纹图谱。寻找两组间发生明显变化的差异代谢物,富集差异代谢通路, 获得整个生物体的代谢轮廓。 技术优势: 1、代谢组学能放大基因组和蛋白组的微小变化,具有较高的灵敏度、分辨率; 2、具有较宽的动态检测范围;3、相比于基因组学和蛋白质组学,检测费用更为低廉;4、代谢组学比较贴近生物体表型,能更直接、准确地反映生物体的生理病理状态,适合于生物样本中潜在标志物的筛选,疾病分期等。武汉植物靶向代谢组学分析方法代谢组学技术可应用于疾病早期诊断。
代谢组学的研究领域有哪些?1、疾病机制研究。2、疾病诊断与防治。3、新药筛选和开发。4、药物作用机制的研究。5、药物毒性评价。6、植物的细胞代谢组学研究。7、微生物代谢组学研究。代谢组能够检测到的代谢物含量是多少?不同检测平台的灵敏度不一样,灵敏度比较高,可达到fM级。另外,相同含量的不同物质,由于自身化学性质不同,质谱的离子化效率、信号响应强度会差异很大。物质的检测灵敏度跟自身的化学性质有关,化学性质的影响主要表现在离子化效率和质谱碎裂行为两方面。因此,相同含量的不同物质,可能一个能检测出来,另一个检测不出来。
代谢组学尿液样本收集:1)取空腹晨尿、中段尿(临床)或晨间1 h尿(动物)于50 mL离心管中;2)4 ℃ 下10000 rpm离心10 min取上清,用1.5 mL离心管分装,保存于-80 ℃。3)动物1 h尿量不够的情况下,可分多次收集尿液;如需收取24 h尿液,需要使用带低温装置的代谢笼收集,并且及时冻存样本。4)收集完尿液样本后,建议使用液氮淬灭15 min后,再分装多管后于-80 ℃冻存。组织样本收集:动物组织(包括脑、心、肝、脾、肺、肾、肌肉和皮肤等;软体动物如血吸虫):1)取适量组织,用预冷的PBS缓冲液或生理盐水清洗干净;2)迅速剥去非必需的脂肪和结缔组织,再用PBS缓冲液或生理盐水冲洗干净;3)用干净的无尘吸水纸吸干水分,将组织分成50-100 mg / 管分装待用;4)管子上做好标记后迅速放入液氮中冷冻处理至少15 min,-80 ℃冻存;干冰运输。靶向代谢组学着重对于设定好的目标代谢物进行定性、量检测分析和研究。
代谢组学细胞样本收集:悬浮细胞:1)连同培养基转移到1.5 mL的进口离心管中。2)低速离心5 min(低于3000 rpm),使细胞沉淀于离心管的底部(1*107个细胞为宜)。3)倒掉培养基(尽量倒干净),用预冷的PBS反复冲洗2 ~ 3次,低速离心5 min,弃上清。4)标记离心管,将离心管的尖的一端插入液氮中,淬灭细胞沉淀1 min,-80 ℃冻存,干冰寄送。注意事项:1. 培养基倾倒时尽量倒干净,可使用滤纸将残留培养液吸净;2. 甲醇/水请使用色谱纯及以上规格;3. 液氮淬灭细胞时,请小心避免离心管破碎导致样本受损;4. 建议细胞样本在进行培养时多准备样本,以备后续使用。与基因组学和蛋白质组学相比, 代谢组学的研究侧重于相关特定组分的共性。武汉植物靶向代谢组学分析方法
为什么选择代谢组学作为科研技术手段?北京靶向代谢组学服务
代谢组学样本收集注意事项:1.对于动物组织样本无法满足50mg/样,如海马组织,大脑组织等,可考虑同组混样以达到50mg/样的要求。2.对于含水量高的果实进行取样很难保持高度均一性(如番茄的果皮、果肉等),建议将整个果实进行液氮研磨后冻干混匀,对混匀后的粉末进行称重分装,冻存。3.尽量不要使用锡箔纸以及自封袋包装样本,建议将样本液氮研磨后使用离心管/冻存管进行分装。4.在使用PBS缓冲液/超纯水进行漂洗时,需要尽快处理。5.植物各类组织样本建议都使用超纯水进行漂洗完之后,再研磨分装冻存,防止因种植过程中施加的一些肥料、农药等含有表面活性剂或其他杂质,对后续实验造成影响。北京靶向代谢组学服务