转录组及转录组测序(RNA-seq):转录组即特定细胞在某一功能状态下所能转录出来的所有RNA的总和,包括mRNA和非编码RNA。转录组测序(RNA-seq)主要通过高通量测序研究特定组织或细胞在某个时期转录出来的mRNA的表达量,进而对相关基因和表型的关系进行分析。本质上讲RNA-seq就是在用一种新的方法实现“基因决定性状”的经典思路。在RNA-seq之前用于研究基因组表达分析的主要技术是基因芯片,不过由于高通量测序成本的下降,RNA-seq的运用愈来愈普遍。转录组学测序样品纯度要求,电泳检测28S:18S至少大于1.8。广东靶向转录组学领域
单细胞转录组学测试步骤:第1步就是把单个细胞分选出来。分选的方式也比较多,物理切割,酶消化,FACS分选等。假如已经分到了一个单细胞,跟常规的转录组步骤上是一样的。下一步就是把单细胞里的RNA提取出来去建库测序。但是一个细胞里的RNA含量是比较少的,难建库成功。这个里面“量”的概念很有意思。比如说单细胞量少,需要特殊处理。因为单细胞里面RNA的量少,所以说整个富集的过程中会出现一部分基因在一个细胞里能检测到,在另外一个细胞里面检测不到,而每个细胞里面的检测存在一个随机性,同时单细胞测序深度比较低,所以说分析时相比于普通转录组有一些是需要特别注意,但整体的分析思路是类似的。杭州单细胞转录组学检测价格转录组学是功能基因组学研究的重要组成部分。
circRNA转录组学:是一类具有闭合环状结构的非编码RNA分子,没有5′帽子结构和3′poly(A)结构,主要位于细胞质或储存于外泌体中,不受RNA外切酶影响,表达更稳定且不易降解,已被证明普遍存在于多种真核生物体内[1]。大多数circRNA是由外显子环化而成,也有部分circRNA是由内含子环化而成的套索结构。同时由于circRNA含有大量的miRNA应答原件(MREs),能与AGO蛋白形成RNA诱导沉默复合体(RISC)的催化关键,然后导致circRNA降解。根据来源,circRNA可大致分为四类:全外显子型的circRNA,内含子和外显子组合的EIcircRNA,内含子组成的套索型ciRNA,由病毒RNA基因组、tRNA、rRNA、snRNA等环化产生的circRNA。
转录组学测序流程:1、样品RNA准备。2、测序文库构建。3、DNA成簇(Cluster)扩增。4、高通量测序(Illumina)。5、数据分析。转录组的分析大致有以下几种情况:1、同一物种在发育过程中的各时间节点的基因表达特点及存在的差异;2、不同品系之间存在的差异表达基因;3、不同的外界条件处理,如细菌、病毒、光照、紫外、干旱、高温、高盐胁迫,对基因表达的影响;4、同一个体,不同组织之间的基因表达差异。简而言之,转录组学是从RNA水平研究基因表达的情况。转录组学差异基因太多,注释信息太杂乱,怎么挑选目标基因?
RNA-Seq转录组学的应用:RNA-Seq即对转录组进行测序和分析。一般来说在研究所会委托公司测序得到数据自己进行后续的生信分析(质控,mapping,差异基因表达分析,SNV分析等)。RNA-Seq有着巨大的应用前景。在不同背景下比较mRNA水平同一物种,不同组织:研究基因在不同部分的表达情况。同一物种,同一组织:研究基因在不同处理下,不同条件下的表达变化。同一组织,不同物种:研究基因的进化关系。时间序列实验:基因在不同时期的表达情况与发育的关系。基因分类:找到细胞特异,疾病相关,处理相关的基因表达模式,用于诊断疾病和预测等。基因网络和通路:基因在细胞活动中的功能,基因间的相互作用。转录组学测序可以同时测到mRNA、lncRNA、micRNA以及circRNA么?北京外泌体microRNA转录组学分析方法
转录组学可以准确地识别可变剪切和融合基因。广东靶向转录组学领域
转录组学(transcriptomics)是功能基因组学(FunctionalGenomics)研究的重要组成部分,是一门在整体水平上研究细胞中所有基因转录及转录调控规律的学科。随着人类基因组计划HGP(HumanGenomeProject)的完成,科学家也逐渐认识到对基因结构序列的研究只是基因组学研究的一部分,并不能揭示所有的生命奥秘,所以接下来需要解决的问题是:研究这些基因序列的功能、参与的生命过程、表达调控方式,以及这些基因在不同的时空条件下的表达差异等。这些问题都需要功能基因组学技术来解决,而转录组学技术是功能基因组学研究的重要组成部分。对基因及其转录表达产物功能研究的功能基因组学,将为疾病控制和新药开发、作物和畜禽品种的改良提供新思路,为人类解决健康问题、食物问题、能源问题和环境问题提供新方法。广东靶向转录组学领域