转录组学技术路线及研究意义：转录组测序的研究对象为特定细胞在某一功能状态下所能转录出来的所有RNA的总和，包括mRNA和非编码RNA。相对于传统的芯片杂交平台，转录组测序无需预先针对已知序列设计探针，即可对任意物种的整体转录活动进行检测，提供更准确的数字化信号，更高的检测通量以及更普遍的检测范围，是目前深入研究转录组复杂性的强大工具。基于高通量测序平台的转录组测序技术能够全方面获得物种特定组织的转录本信息，从而进行基因表达水平研究、新转录本发现研究、转录本结构变异研究等。转录组学可以在单核苷酸水平对任意物种的整体转录活动进行检测。全长转录学组分析

RNA-Seq转录组学技术优势：RNA-seq技术可以检测到低水平表达、未识别的转录子和新拼接亚型基因。另一方面，与基因芯片相比，RNA-Seq有一个更广的检测动态范围，可以研究编码和非编码RNA，更易于基因网络的构建、发现选择性剪切转录物，检测到等位基因的具体表达方式，也可以用来提取基因型信息。在RNA-Seq单细胞研究中，一个主要优势是可以分析整个转录序列，而不是有限制数量的基因，并且，研究DNA和RNA的方法并不是相互排斥的，他们可以相互结合使用，产生更多的生物学上重要的信息。上海RNA转录组学转录组学可应用于疾病标志物筛查、疾病的诊断和分型、疾病复发诊断。

转录组测序推荐的测序数据量？转录组测序所需数据量与所研究物种的基因组大小有关，基因组越大，则所需数据量越大。按照我们的经验来说：常规物种一般建议6G数据即可；基因组较大的物种推荐8G以上数据，比如：小麦建议10G数据起，甘蔗、甘薯建议至少8G数据。转录组测序必须做生物学重复么？需要几个重复？生物学重复是生物实验所必须的，转录组测序也不例外，至少3 次生物学重复。准备生物重复样品时，通过对实验的预先设计和控制，尽可能将与实验处理无关的背景条件控制在同一水平，减少批次效应对结果的影响。

转录组是特定发育阶段或生理条件下细胞内的完整转录信息的汇合，表示了基因表达的中间状态。转录组测序可以对所有转录物进行分类、确定基因的转录结构、量化转录物的表达水平。蛋白质是生命功能的直接执行者，蛋白组是一种细胞乃至一种生物所表达的全部蛋白质。整合转录组学和蛋白质组学的表达数据对生物样本进行研究，可以从整体上解释生物学问题，探究生物体生理和疾病机理等。转录组学应用于胃肠瘤发生机制研究：利用转录组学可检测瘤细胞恶化过程中的RNA（编码RNA及非编码RNA）的变化，有助于更好地理解胃肠瘤的发生机制。转录组学测序样品纯度要求，电泳检测28S:18S至少大于1.8。

转录组学测序流程：1、样品RNA准备。2、测序文库构建。3、DNA成簇(Cluster)扩增。4、高通量测序(Illumina)。5、数据分析。转录组的分析大致有以下几种情况：1、同一物种在发育过程中的各时间节点的基因表达特点及存在的差异；2、不同品系之间存在的差异表达基因；3、不同的外界条件处理，如细菌、病毒、光照、紫外、干旱、高温、高盐胁迫，对基因表达的影响；4、同一个体，不同组织之间的基因表达差异。简而言之，转录组学是从RNA水平研究基因表达的情况。狭义上转录组学的指所有mRNA的组合。全长转录学组分析

转录组学广义上指在某一生理条件下，细胞内所有转录组产物的组合。全长转录学组分析

单细胞转录组学技术：10×genomics技术：首先在凝胶微珠上种上特定的DNA的片段，DNA的片段由三部分组成：Barcode、UMI、PolyT组成。Barcode是16个碱基的长度。一共有400万种Barcode，一个微珠是对应于一种Barcode，通过这400万种Barcode，可以把凝胶微珠给区分开（通过barcode可以把cell分开）。UMI是一段随机序列，也就是说每一个DNA分子，都有自己的UMI序列（一个微珠上有很多种UMI，通过UMI可以把RNA分子分开，并可以标记RNA分子的数量）。10个碱基长的UMI，有100万种序列的变化（4^10=1,048,576），UMI的作用是为了区分哪些reads是来自于一个原始cDNA分子区分基因片段重复还是duplication及区分是真实的SNP位点还是PCR产生的突变。通过10×genomics仪器将单个细胞与单个凝胶微珠通过油相混在一起，形成油包水的小微滴。全长转录学组分析