circRNA转录组学:是一类具有闭合环状结构的非编码RNA分子,没有5′ 帽子结构和3′ poly(A)结构,主要位于细胞质或储存于外泌体中,不受RNA外切酶影响,表达更稳定且不易降解,已被证明普遍存在于多种真核生物体内。大多数circRNA是由外显子环化而成,也有部分circRNA是由内含子环化而成的套索结构。转录组学为什么原核物种只能做有参转录组分析?由于原核生物的基因组中存在大量基因重叠区域、操纵子及多顺反子,如果按照无参转录组分析策略进行组装的话,难度较大,组装结果存在较大风险。转录组学是研究特定的细胞、组织或个体在特定时间和状态下所转录出所有 RNA 的学科。江苏外泌体转录组学技术
转录组学测序结果的影响因素?RNA的降解严重影响测序的质量,RNA降解后,加入poly-A后无法捕获纯化mRNA,因此,随机引物反转录无法得到全部的cDNA,导致测序结果出现明显的3‘-和5’-偏向。文库中的poly-A多聚物的存在会对测序信号产生干扰,影响测序结果的准确性;同时由于转录组中转录本的丰度不一致,实验前需要对样本进行均一化处理,否则高丰度的表达基因会掩盖低丰度表达基因,导致寻找新基因失败或者是获得大量无意义的重复序列。广东单细胞转录组学分析研究基于高通量测序平台的转录组学测序技术能够全方面获得物种特定组织的转录本信息。
circRNA转录组学生物学功能:circRNA主要存在于细胞质或外泌体中,具有组织特异性、疾病特异性、时序特异性及高稳定性等特征。近几年,大量的研究表明circRNA在生物的生长发育、胁迫应答、疾病发生和发展等方面密切相关,并预测其在疾病诊断标记物等方面的应用前景,但其生物学功能在很大程度上仍然未知。目前认可度比较高的circRNA生物学功能。miRNAsponge。circRNA富含miRNA结合位点来充当miRNA海绵作用,阻止miRNA在3′非翻译区与mRNA相互作用,进而间接调控miRNA下游靶基因的表达。
RNA-Seq转录组学技术优势:相比基因芯片和标记的碱基序列的测序方法,RNA-seq具有一定的优越性。与基因芯片相比,RNA-Seq不只可以在更高的分辨率下用来测量基因的表达水平情况,还可以揭示未知的转录组和拼接亚型,并为选择性拼接亚型提供定量分析。相对于传统的芯片杂交平台,转录组测序无需预先针对已知序列设计探针,即可对任意物种的整体转录活动进行检测,提供更精确的数字化信号、更高的检测通量以及更普遍的检测范围,是目前深入研究复杂性转录组的强大工具。鉴于这些优势,RNA-Seq很快就被应用到关于瘤病相关研究的多个方面。转录组学测序结果的影响因素?
转录组学应用于胃肠瘤转移机制研究:circRNA是一种非编码RNA,可以多种方式参与生物学功能,如细胞增殖、细胞周期、侵袭和转移等。近年来研究发现,环状RNA可以通过海绵吸附微小RNA和RNA结合蛋白参与转录后调控,从而影响瘤耐药过程中的DNA修复、凋亡、增殖、细胞转运,以及介导瘤耐药的细胞内酶,进而在瘤耐药中发挥重要调节作用。有研究证实通过干扰环状RNA的表达,可以提高瘤对药物的敏感性,提示环状RNA可能为抗瘤药物耐药性的研究提供新的靶点。转录组学可以准确地识别可变剪切和融合基因。江苏外泌体转录组学技术
RNA-Seq转录组学即对转录组进行测序和分析。江苏外泌体转录组学技术
转录组学研究的方法:在早期,由于测序价格昂贵、基因序列数目有限,转录组学研究者只能进行极少数特定基因的结构功能分析和表达研究。近十几年,分子生物学技术的快速发展使高通量分析成为可能,这为真正意义上的转录组学的研究奠定了基础。这些高通量研究方法主要可以分为两类:一类是基于这类方法包括表达序列标签技术、基因表达系列分析技术、大规模平行测序技术、RNA测序技术其中,Microarray和EST技术是较早发展起来的先驱技术,SAGE、MPSS和RNA-sea是高通量测序条件下的转录组学研究方法转录组学研究有助于了解特定生命过程中相关基因的整体表达情况,进而从转录水平初步揭示该生命过程的代谢网络及其调控机理。江苏外泌体转录组学技术