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河南泛素化修饰蛋白质组学主要技术

来源: 发布时间:2022-04-19

泛素化修饰蛋白质组技术原理:首先将蛋白样本酶解成肽段混合物,然后使用液相色谱对酶解后的肽段混合物进行组分分离以降低样本复杂程度,然后通过高质量的泛素化修饰类抗体和生物材料对修饰肽段进行富集,之后上样至液相色谱-串联质谱中进行分析定量。技术优势:1、高特异性的修饰类泛抗体;2、高分辨率、高灵敏度质谱仪;应用领域:泛素化修饰还参与了细胞周期、增殖、细胞凋亡、分化、转录调控、基因表达、转录调节、信号传递、损伤修复、炎症免疫等几乎一切生命活动的调控。泛素化心血管等疾病的发病密切相关。因此,作为近年来生物化学研究的一个重大成果,它已然成为研究、开发新药物的新靶点。蛋白质翻译后修饰在许多细胞过程中起着关键作用。河南泛素化修饰蛋白质组学主要技术

蛋白质糖基化修饰组学技术服务:糖基化是在酶的控制下,蛋白质或脂质附加上糖类的过程,发生于内质网和高尔基体等部位。在糖基转移酶作用下将糖转移至蛋白质,和蛋白质上的氨基酸残基共价结合。蛋白质经过糖基化作用,形成糖蛋白。糖基化是对蛋白的重要的修饰作用,有调节蛋白质功能作用。凝素亲和法是目前糖蛋白质组学中应用比较普遍的分离富集方法。凝集素(lectin)是一类糖结合蛋白质,能专一识别某一特殊结构的单糖或聚糖中特定的糖基序列而与之结合,它们与糖链可逆非共价结合,糖蛋白或糖肽被凝集素捕获之后,通常用特定的单糖通过竞争结合凝集素将糖蛋白或糖肽洗脱下来。上海磷酸化修饰蛋白质组学主要技术蛋白质磷酸化修饰的免疫印迹技术优点:能够特异鉴定单个磷酸化位点。

甲基化修饰蛋白质组学技术原理:目前用于甲基化蛋白质组分析的甲基化肽段富集抗体分为精氨酸甲基化(Me-R)抗体和赖氨酸甲基化(Me-K)抗体两大类。根据氨基酸残基上所含甲基化修饰基团数量的不同,精氨酸甲基化(Me-R)抗体又包括:单甲基化精氨酸(MMA)抗体、非对称二甲基化精氨酸(ADMA)抗体和对称二甲基化精氨酸(SDMA)抗体;赖氨酸甲基化(Me-K)抗体又包括:赖氨酸单甲基化(K-Me)抗体、赖氨酸二甲基化(K-2Me)抗体和赖氨酸三甲基化(K-3Me)抗体。其中,Me-R的各类抗体需要单独使用,而Me-K抗体可以混合使用。

蛋白质翻译后修饰组学:翻译后修饰(Post-translational modification, PTM)是指对翻译后的蛋白质进行共价加工的过程。它通过在一个或多个氨基酸残基加上修饰基团,可以改变蛋白质的物理、化学性质,进而影响蛋白质的空间构象和活性状态、亚细胞定位、折叠及其稳定性以及蛋白质-蛋白质相互作用。蛋白质翻译后修饰的丰度变化在生命活动研究中具有重大意义,异常的翻译后修饰会导致多种疾病的发生。质谱可以分辨蛋白质修饰前和修饰后分子量上的变化,因此只要知道靶蛋白翻译后修饰前后分子量的变化,就能对翻译后修饰方式进行鉴定和定量。蛋白质修饰位点能够影响蛋白的多种属性,包括蛋白质折叠、活性以及之后的功能。

定量磷酸化蛋白质翻译修饰组学:蛋白质发生磷酸化是重要的翻译后修饰,它与信号传导、细胞周期、生长发育机理等诸多生物学问题有密切关系。研究蛋白质磷酸化对阐明蛋白质功能具有重要意义。将磷酸化肽段TiO2富集技术和iTRAQ/TMT/Lable free技术相结合,实现对磷酸化蛋白质组学的定量研究。技术原理:在磷酸化肽段富集前先进行 iTRAQ/TMT 标记,然后通过 TiO2 富集方法获得高纯度的磷酸化肽段,之后结合高分辨率质谱完成对样品的定量分析。蛋白质翻译后修饰有什么生物学意义?贵州蛋白质琥珀酰化修饰组学质谱鉴定

磷酸化修饰蛋白质组学是原核生物和真核生物中比较重要的调控修饰形式。河南泛素化修饰蛋白质组学主要技术

琥珀酰化修饰蛋白质组技术特点:采用主流抗体亲和富集方法,特异性高,富集效率好;通过高分辨率、高扫描速度的质谱,对富集的琥珀酰化肽段进行大规模鉴定;结合常用的定量技术可对不同样品间的琥珀酰化水平差异进行定量比较。适用范围:药物作用靶点研究;疾病标志物筛选;植物胁迫/抗逆研究;作用机制研究;要求物种具有蛋白质参考数据库、EST序列(转录组)或基因组注释信息。应用方向:线粒体代谢、生物合成与代谢、中心代谢途径、炎症与疾病。河南泛素化修饰蛋白质组学主要技术

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