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贵州蛋白质琥珀酰化修饰组学质谱鉴定

来源: 发布时间:2022-04-19

翻译后修饰蛋白组分析:蛋白质翻译后修饰(PTMs)是指蛋白质在翻译中或翻译后的化学修饰过程。蛋白质翻译后修饰(PTMs)通过给蛋白质添加磷酸酯、乙酸酯、酰胺基或甲基等官能团增加蛋白质组的功能多样性,并影响正常细胞生物学和发病机理的几乎所有方面。蛋白质翻译后修饰在许多细胞过程中起着关键作用,如细胞分化、蛋白质降解、信号传导和调节过程、基因表达调节以及蛋白质相互作用。蛋白质翻译后修饰PTMs通常包括磷酸化、糖基化、泛素化、亚硝基化、甲基化、乙酰化、脂质化和蛋白水解。因此,PTM的特征(包括修饰类别和修饰位点)在细胞生物学以及疾病诊断和预防研究中至关重要。乙酰化修饰组学技术服务采用肽段预分离降低高丰度组蛋白对蛋白乙酰化鉴定的影响。贵州蛋白质琥珀酰化修饰组学质谱鉴定

琥珀酰化修饰蛋白质组:蛋白质琥珀酰化(succinylation)修饰是指琥珀酰基团供体(如琥珀酰辅酶A)通过酶学或者非酶学的方式将琥珀酰基团共价结合到底物蛋白质的赖氨酸残基的过程。琥珀酰化修饰赋予赖氨酸基团2个负电荷,能够引发更多蛋白质特性的改变,且琥珀酰基团空间结构较大,对于蛋白质结构和功能的影响更为明显。在真核和原核生物中,琥珀酰化是一种保守的修饰类型。琥珀酰化和乙酰化具有非常强的相关性,在已有的研究中,大量发生琥珀酰化的位点同时也能检测到乙酰化修饰。琥珀酰化参与了很多关键能量代谢途径(包括三羧酸循环、糖代谢等),影响线粒体中的代谢过程,对线粒体失调相关的疾病的研究具有重要价值。江苏蛋白质糖基化修饰组学质谱分析研究蛋白质磷酸化对阐明蛋白质功能具有重要意义。

蛋白质翻译后修饰:蛋白质翻译后修饰 (Protein translational modifications,PTMs) 通过功能基团或蛋白质的共价添加、调节亚基的蛋白水解切割或整个蛋白质的降解来增加蛋白质组的功能多样性。这些修饰包括磷酸化、糖基化、泛素化、亚硝基化、甲基化、乙酰化、脂质化和蛋白水解,几乎影响正常细胞生物学和发病机制的所有方面。因此,识别和理解 PTM 在细胞生物学和疾病疗理和预防的研究中至关重要。蛋白质翻译后修饰 (PTMs) 进一步促进了从基因组水平到蛋白质组复杂性的增加。PTMs 是一种化学修饰,在功能蛋白质组中发挥关键作用,因为它们调节活性、定位以及与其他细胞分子(如蛋白质、核酸、脂质和辅助因子)的相互作用。

乙酰化修饰蛋白组学应用方向:1、乙酰化修饰与细胞基因表达调控、表观调控、细胞凋亡、细胞代谢、信号转导、蛋白质稳定性等生理过程研究。2、乙酰化引起的代谢疾病、代谢紊乱发生等疾病机理研究。乙酰化生物学意义:1、调节DNA-蛋白、蛋白-蛋白相互作用;2、与其他PTMs发生crosstalk;3、调节酶活性;4、调控蛋白亚细胞定位。生物领域各个研究方面,如:1、农林领域:抗逆胁迫机制,生长发育机制,育种保护研究等;2、 畜牧业:肉类及乳品质研究,致病机理研究等。蛋白质磷酸化修饰组学具有全方面性。

泛素化修饰PRM定量验证:原理: 泛素化修饰是一种重要的翻译后修饰。泛素-蛋白酶体系统介导了真核生物体内80%~85%的蛋白质降解。此外,泛素化修饰还可以直接影响蛋白质的活性和定位,调控包括细胞周期、细胞凋亡、转录调控、DNA 损伤修复以及免疫应答等在内的多种细胞活动。首先对泛素化的蛋白进行胰酶消化,在赖氨酸的修饰位点上会产生两个甘氨酸的残基(K-GG),利用对泛素化赖氨酸(K-GG)具有高亲和力的基序抗体,特异性富集复杂样本中的泛素化肽段,结合LC-MS/MS蛋白质定量方法,实现大规模泛素化蛋白质定性定量分析。在细胞中,乙酰化修饰的反应由乙酰基转移酶所催化,将乙酰辅酶A的乙酰基转移并添加在蛋白质赖氨酸残基上。贵州蛋白质琥珀酰化修饰组学质谱鉴定

蛋白磷酸化修饰过程是通过蛋白激酶催化,将磷酸基团从ATP转移到多肽底物的丝氨酸、或酪氨酸残基上。贵州蛋白质琥珀酰化修饰组学质谱鉴定

泛素化修饰蛋白质组学的作用:泛素化、心血管等疾病的发病密切相关。因此,作为近年来生物化学研究的一个重大成果,它已然成为研究、开发新药物的新靶点。技术原理是首先将蛋白样本酶解成肽段混合物,然后使用液相色谱对酶解后的肽段混合物进行组分分离以降低样本复杂程度,然后通过高质量的泛素化修饰抗体和生物材料对修饰肽段进行富集,之后上样至液相色谱-串联质谱中进行分析定量。技术优势:高特异性的修饰抗体;高分辨率、高灵敏度质谱仪;鉴定通量高;可与代谢组学等进行多组学联合分析。贵州蛋白质琥珀酰化修饰组学质谱鉴定

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