定量蛋白质组学方法学介绍:Label-free:Label-free定量,即非标记的定量蛋白质组学,不需要对比较样本做特定标记处理,只需要比较特定肽段/蛋白在不同样品间的色谱质谱响应信号便可得到样品间蛋白表达量的变化,通常用于分析大规模蛋白鉴定和定量时所产生的质谱数据。Label-free定量不需要标记处理,操作简单,可以做任意样本的总蛋白质差异定量,但对实验操作的稳定性、重复性要求较高,准确性也较标记定量差。因此,Label-free技术适合于大样本量的定量比较,以及对无法用标记定量实现的实验设计。对人类而言,蛋白质组学的研究终究要服务于人类的健康。TMT/iTRAQ标记定量蛋白质组学价格
非标定量法(Label-free)是通过比较质谱分析次数或质谱峰强度,分析不同来源样品蛋白的数量变化,认为肽段在质谱中被捕获检测的频率与其在混合物中的丰度成正相关,因此蛋白质被质谱检测的计数反映了蛋白质的丰度,通过适当的数学公式可以将质谱检测计数与蛋白质的量联系起来,从而对蛋白质进行定量。按照其原理主要分为两种,第1种spectrumcounts类的非标记方法,发展比较早,已经形成多种定量算法,但是主要的原理都是以MS2的鉴定结果为定量基础,各种方法的差别在于后期算法在大规模数据上的修正。第二种非标记定量的原理是以MS1为基础,计算每个肽段的信号强度在LC-MS上的积分。TMT/iTRAQ标记定量蛋白质组学价格蛋白质组学技术并带领生物技术取得关键性的突破。
蛋白质组学样品寄样要求:动物组织的样本蛋白量相对较高,送样量的要求也相对比较宽松,一般提供50~100mg的量即可。此外,组织上有血迹、脂肪、结缔组织的还需要用PBS和组织剪将其清理干净。送样前将样品用液氮速冻5min,放置在-80℃保存,送样时需要置于干冰环境中运输。动物的悬浮培养细胞也是比较热门的蛋白组学研究对象,如果想做细胞的蛋白组学,起码需要1×107个细胞,离心后收集,置于-80摄氏度环境中。蛋白质组学,指对某一基因组所表达的所有蛋白质及其特征进行大规模、系统化地研究,以期望在蛋白质水平上解释控制复杂的生命活动的分子网络。
LabelFree(非标记蛋白质组学技术):应用:1.需要快速在大量样本中找到差异表达的蛋白组合。2.需要在较短时间以较低成本得到具有提示意义的蛋白表达数据。3.需要检测的样品蛋白含量低。4.需要检测相互作用蛋白。技术特点:1.对质谱仪器设备要求较高,色谱和质谱需要同时有较好的稳定性和重复性。2.需要有特殊的定量分析软件。3.对样品中蛋白质总量要求较低,实验周期短,实验费用低。4.不需要额外并且昂贵的标记试剂,排除了标记过程带入实验误差的风险,同时也不必考虑标记效率的问题。DIA 定量蛋白质组学的循环时间固定,扫描点数均匀,定量准确度高。
蛋白质组学我的介绍:蛋白质组学(proteomics)采用高通量和大规模的研究手段,从整体的角度分析细胞内动态变化的蛋白质组成成份、表达水平与修饰状态,了解蛋白质之间的相互作用与联系,揭示蛋白质功能与细胞生命活动规律,之后达到构建出细胞的“功能图”的目的。蛋白质作为生命活动的物质承担者、生理功能的执行者和生命现象的直接体现者,研究蛋白质对阐明生命体的变化机制具有重要作用。蛋白质组研究不只可以实现与基因组的关联,揭示生命活动的发生规律。同样对人类重大疾病的发生与发展的病理机制研究也具有重要作用。生命体的生理、病理过程,药物和环境因子的作用都依赖于蛋白质,并引起蛋白质的变化。蛋白质组学研究对提高我国生物医学原始创新能力、重大疾病防诊治能力和国民健康水平以及新药研发能力、生物医药产业的发展具有重大的战略意义。蛋白质组学技术有电喷雾质谱。北京外泌体蛋白质组学主要技术
DIA 定量蛋白质组学可以采集所有离子及碎片图谱,重现性好。TMT/iTRAQ标记定量蛋白质组学价格
定量蛋白质组学分析(QuantitativeProteomics)是对一个基因组表达的全部蛋白质或一个复杂混合体系内所有蛋白质进行精确鉴定和定量。可用于筛选和寻找任何因素引起的样本之间的差异表达蛋白,结合生物信息学揭示细胞生理病理等功能,同时也可对某些关键蛋白进行定性和定量分析。目前定量蛋白质组学技术常见标记(Label)和非标记的(LabelFree)定量策略。定量蛋白质组学技术常见的几类主要包括:LabelFree定量蛋白组分析、SILAC与免疫共沉淀蛋白互作分析、MRM/PRM定量蛋白组学分析、SILAC/Dimethyl标记定量蛋白组分析、SWATH定量蛋白组学、TMT/iTRAQ/multinotch定量蛋白组学分析。TMT/iTRAQ标记定量蛋白质组学价格