circRNA转录组学生物学功能:circRNA主要存在于细胞质或外泌体中,具有组织特异性、疾病特异性、时序特异性及高稳定性等特征。近几年,大量的研究表明circRNA在生物的生长发育、胁迫应答、疾病发生和发展等方面密切相关,并预测其在疾病诊断标记物等方面的应用前景,但其生物学功能在很大程度上仍然未知。目前认可度比较高的circRNA生物学功能。miRNAsponge。circRNA富含miRNA结合位点来充当miRNA海绵作用,阻止miRNA在3′非翻译区与mRNA相互作用,进而间接调控miRNA下游靶基因的表达。RNA-Seq转录组学即对转录组进行测序和分析。深圳外泌体转录组学领域
单细胞 RNA-seq转录组学的工作流程:单细胞 RNA 测序等高通量单细胞转录组学技术通常从针对不同瘤和组织类型(解离、分选和分离细胞等)量身定制的实验工作流程开始,然后产生可以比对的序列,量化、质量控制 (QC) 过滤和以不同方式标准化,以实现许多下游计算分析,例如聚类分析以识别转录不同的细胞类型和亚群,等位基因分析以识别单核苷酸变异(SNV,用星号表示)或拷贝数变体(CNV)、轨迹分析、剪接检测或瘤的微环境(TME)相互作用的推断中。广州RNA转录组学转录组学可以在单核苷酸水平对任意物种的整体转录活动进行检测。
全转录组测序为什么需要构建两个文库?全转录组测序需要构建2个测序文库,一个小RNA文库和一个去除核糖体RNA的链特异性文库,然后分别上机测序。小RNA长度较短,一般小于50nt,采用测序策略为50SE。其他三类RNA序列一般大于200,通常在1000以上,可达几万,通过片段化构建150PE测序文库。然后小RNA文库可以获得miRNA序列信息,去核糖体的链特异性文库可以获得mRNA、lncRNA和circRNA的序列信息。转录组学即特定细胞在某一功能状态下转录出来的所有RNA的总和,包括mRNA和非编码RNA。
全长转录组测序的优势:1、全方面鉴定可变剪切;2、发现更多新基因;3、有效改善基因组注释;4、鉴定更多的LncRNA;5、准确定位融合基因。研究思路:由于全长转录组测序是基于第三代测序技术,因而其成本依然较高,如果全部研究项目均基于全长转录组,通常来说很难承担,因此,全长转录组测序一般与普通转录组测序相结合。宏转录组学是什么?宏转录组学也称为环境转录组学,指从整体水平上研究某一特定环境、特定时期菌群群体全部基因转录情况以及转录调控规律,以揭示微生物在不同环境压力下的适应机制,探索环境与微生物之间的相互作用机理。转录组学狭义上指所有mRNA的组合。
单细胞转录组学技术:单细胞转录组目前主要有三种方法:SMART扩增技术、10×genomics技术及Andeplete技术。SMART扩增技术比较关键的技术,就是设计了2个特殊的引物。再配合用MMLV逆转录酶进行逆转录。特殊引物1由中间PolyT序列加上一段通用序列及3’末端两个简并碱基构成,但在PolyT的3’端倒数第二个碱基是A、C、G而非T的简并碱基,而倒数第1个为简并碱基,这样做的好处是让它正好结合在mRNA的3’端连到Poly(A)尾巴的这个连接处,而不会结合到mRNA的别的地方。这样就保证了逆转录的起始位置正好是mRNA的3’端的序列终止位置。转录组学灵敏度高,可以检测细胞中少至几个拷贝的稀有转录本。广州RNA转录组学
宏转录组学以生态环境中的全部RNA为研究对象,避开了微生物分离培养困难的问题。深圳外泌体转录组学领域
circRNA转录组学:是一类具有闭合环状结构的非编码RNA分子,没有5′帽子结构和3′poly(A)结构,主要位于细胞质或储存于外泌体中,不受RNA外切酶影响,表达更稳定且不易降解,已被证明普遍存在于多种真核生物体内[1]。大多数circRNA是由外显子环化而成,也有部分circRNA是由内含子环化而成的套索结构。同时由于circRNA含有大量的miRNA应答原件(MREs),能与AGO蛋白形成RNA诱导沉默复合体(RISC)的催化关键,然后导致circRNA降解。根据来源,circRNA可大致分为四类:全外显子型的circRNA,内含子和外显子组合的EIcircRNA,内含子组成的套索型ciRNA,由病毒RNA基因组、tRNA、rRNA、snRNA等环化产生的circRNA。深圳外泌体转录组学领域