转录组及转录组测序(RNA-seq):转录组即特定细胞在某一功能状态下所能转录出来的所有RNA的总和,包括mRNA和非编码RNA。转录组测序(RNA-seq)主要通过高通量测序研究特定组织或细胞在某个时期转录出来的mRNA的表达量,进而对相关基因和表型的关系进行分析。本质上讲RNA-seq就是在用一种新的方法实现“基因决定性状”的经典思路。在RNA-seq之前用于研究基因组表达分析的主要技术是基因芯片,不过由于高通量测序成本的下降,RNA-seq的运用愈来愈普遍。RNA-Seq转录组学有着巨大的应用前景。南京外泌体microRNA转录组学定量分析
转录组学为什么原核物种只能做有参转录组分析?由于原核生物的基因组中存在大量基因重叠区域、操纵子及多顺反子,如果按照无参转录组分析策略进行组装的话,难度较大,组装结果存在较大风险。转录组学差异基因数目多少比较合理?不同的处理,不同的研究目标,差异基因的数目是不同的,从几十个到几千个都有可能。但是如果差异基因数目是个位数或者上万,那么就需要和分析人员沟通一下,查一查是否有问题。转录组学差异基因太多,注释信息太杂乱,怎么挑选目标基因?对不同的差异组合进行维恩图分析,挑选共有或者特有的差异基因作为后续的研究对象;根据前人的文献报道,挑选相关差异基因,不要局限在自己研究的物种上。北京外泌体microRNA转录组学定量分析转录组学是一门在整体水平上研究细胞中基因转录的情况及转录调控规律的学科。
转录组学应用于胃肠瘤转移机制研究:circRNA是一种非编码RNA,可以多种方式参与生物学功能,如细胞增殖、细胞周期、侵袭和转移等。近年来研究发现,环状RNA可以通过海绵吸附微小RNA和RNA结合蛋白参与转录后调控,从而影响瘤耐药过程中的DNA修复、凋亡、增殖、细胞转运,以及介导瘤耐药的细胞内酶,进而在瘤耐药中发挥重要调节作用。有研究证实通过干扰环状RNA的表达,可以提高瘤对药物的敏感性,提示环状RNA可能为抗瘤药物耐药性的研究提供新的靶点。
单细胞转录组关键步骤:单细胞的分离和捕获:温和分离,稀有细胞。转录本的捕获和扩增:RNA测序需要0.1-1.0ugtotalRNA,捕获效率10%(5-**NA测序需要1ngDNA,极限稀释加移液分离单细胞;显微操作分选单细胞;流式分选带有表面Marker的单细胞;激光切割实体组织;微流控技术;磁珠捕获,主要用于CTC。它的一个优点是可以结合流式细胞荧光分选(FACS,fluorescentactivatedcellsorting)根据表面Marker分选细胞。因此特别适合分选细胞子集用于测序。它的另一个优点是可以获得细胞形态全览图,提供另外一个维度的信息,可用于鉴定微孔中是否有损伤的细胞或双份细胞,主要缺点是通量低且每个细胞所需的工作量相当大。转录组学可应用于炎症发生机制的发现及干预。
单细胞RNA-seq转录组学工作流程:单细胞RNA测序等高通量单细胞转录组学技术通常从针对不同瘤和组织类型(解离、分选和分离细胞等)量身定制的实验工作流程开始,然后产生可以比对的序列,量化、质量控制(QC)过滤和以不同方式标准化,以实现许多下游计算分析,例如聚类分析以识别转录不同的细胞类型和亚群,等位基因分析以识别单核苷酸变异(SNV,用星号表示)或拷贝数变体(CNV)、轨迹分析、剪接检测或瘤的微环境(TME)相互作用的推断中。单细胞转录组学数据的分析通常因精心设计的研究设计而变得复杂,这些设计可能包括来自患病和未患病个体的样本、在不同时间点(例如,诊疗前和诊疗后)收集的同一个人的多个样本,或来自表现出不同疾病状态的不同个体的多个样本。这样的研究设计可以发现患者共享的转录特征,这些特征可能定义疾病中常见的干扰分子途径。转录组学测序必须做生物学重复么?哈尔滨宏转录学组研究方法
转录组学广义上指在某一生理条件下,细胞内所有转录组产物的组合。南京外泌体microRNA转录组学定量分析
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