LC-MS非靶向代谢组学:LCMS非靶向是通过液质联用(LC–MS)方法检测生物体受扰动或刺激前后大量代谢产物的动态变化,从中找出表达差异的代谢物,进而阐明生物体代谢相关过程的代谢组学技术。LCMS非靶向代谢组学适用于分析难挥发或热稳定性差的代谢产物,具有高通量、高分辨率、高灵敏度的特点。超高压液相色谱或超高效液相色谱(UPLC)通过采用更小粒径的色谱填料配合更高的压力,实现了更好的分离,具体包括更高的分离能力、更快的分离速度以及更好的灵敏度;串联质谱仪在MS扫描模式下,可实现高低碰撞能量快速切换,同时采集代谢物的一二级质谱信息,结合代谢组学数据处理软件对质谱信息的解析,在单次分析中可检测和鉴定几百至几千种代谢物。代谢组学技术可应用于药物毒理学。非靶向代谢组学费用
什么是代谢组学?代谢组学是用来解决什么问题的?代谢组学(Metabonomics/Metabolomics)是发展起来的一门新兴学科,是研究关于生物体被扰动后(如基因的改变或环境变化后)其代谢产物(内源性代谢物质)种类、数量及其变化规律的科学。代谢组学着重研究的是生物整体、组织的内源性代谢物质的代谢途径及其所受内在或者外在因素的影响及随时间变化的规律。代谢组学通过揭示内在和外在因素影响下代谢整体的变化轨迹来反映某种病理生理过程中所发生的一系列生物事件。深圳农学靶向代谢组学非靶向代谢组学无偏向性地对所有小分子代谢物(一般相对分子量小于1000)。
代谢组学样本收集植物组织:果实、种子:1)对于含水量高、体积较大的果实(番茄、西瓜、苹果等)需要先将样品分成“均匀”的小块(≈ 200 mg/样本)分装至2 mL离心管中,标号后迅速放入液氮中冷冻处理至少15 min。2)对于细小的颗粒种子(拟南芥种子、谷物种子等),可以先将同一组的植株种子混匀后再分装(≈ 200 mg/样本)至离心管中,标号后迅速放入液氮中冷冻处理至少15 min。3)对于要求对整个果实进行提取的(整粒葡萄等),需要把果实装在50 mL离心管/自封袋中,标号后迅速放入液氮中冷冻处理至少15min,-80 ℃冻存,干冰寄送。
代谢组学样品收集方法及所需样本量是什么?(1) 血清样品: 避免反复冻融。血液收集在离心管中静置30分钟进行凝血。8000rpm离心10分钟,取上清分装到冻存管中,放置液氮中或-80度冻存;单个样本要求体积为50μL。(2) 尿液样品:临床样本请全部取清晨第1次尿液。尿液直接分装到离心管中,8000rpm离心10分钟,取上清分装到冻存管中,放置液氮中或-80度冻存,-80度冻存;单个样本要求体积为100μL。(3) 其他样本收集办法请咨询谱领工作人员。代谢组学与临床化学较为相似。
代谢组学如何控制临床样本的质量?对于临床的样本建议每组比较低的25个生物学重复,达到30例以上比较好。因为临床样本受外界环境和遗传背景影响较大,需要很多生物学重复来消除这些外在影响。此外,在样本收集过程中,应保持收养的时间段和操作程序尽可能一致。代谢组学样本收集取样基本原则:表示性和一致性:验组与对照组样本在取材部位、时间处理等方面尽可能保持一致,从而保证实验的可信度;迅速性:操作过程迅速,很大限度缩短样本采集到实验的时间;低温原则:所有样本离体后,分离步骤应在4℃或冰上进行,分离好的样本立即存于-80℃,以免样本产生进一步代谢活动。代谢组学是对某一生物或细胞中相对分子量小于1,000的小分子代谢产物进行定性和定量分析的一门新学科。四川LC-MS/MS非靶向脂质组学分析方法
靶向代谢组学(Trgeted metabolomics)则为目标性代谢组学。非靶向代谢组学费用
代谢组学疾病诊断应用:与基因组学和蛋白质组学相比, 代谢组学的研究侧重于相关特定组分的共性,是要涉及研究每一个代谢组分的共性、特性和规律,目前据此目标相距甚远。尽管充满了挑战,研究人员仍然坚信,与基因组学和蛋白质组学相比,代谢组学与生理学的联系更加紧密。疾病导致机体病理生理过程变化,引起代谢产物发生相应的改变,通过对某些代谢产物进行分析,并与 正常人的代谢产物比较,寻找疾病的生物标记物,将提供一种较好的疾病诊断方法。非靶向代谢组学费用
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