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广州高通量转录组学研究方法

来源: 发布时间:2022-03-16

转录组及转录组测序(RNA-seq):转录组即特定细胞在某一功能状态下所能转录出来的所有RNA的总和,包括mRNA和非编码RNA。转录组测序(RNA-seq)主要通过高通量测序研究特定组织或细胞在某个时期转录出来的mRNA的表达量,进而对相关基因和表型的关系进行分析。本质上讲RNA-seq就是在用一种新的方法实现“基因决定性状”的经典思路。在RNA-seq之前用于研究基因组表达分析的主要技术是基因芯片,不过由于高通量测序成本的下降,RNA-seq的运用愈来愈普遍。转录组学狭义上指所有mRNA的组合。广州高通量转录组学研究方法

单细胞转录组学技术:单细胞转录组目前主要有三种方法:SMART扩增技术、10×genomics技术及Andeplete技术。SMART扩增技术比较关键的技术,就是设计了2个特殊的引物。再配合用MMLV逆转录酶进行逆转录。特殊引物1由中间PolyT序列加上一段通用序列及3’末端两个简并碱基构成,但在PolyT的3’端倒数第二个碱基是A、C、G而非T的简并碱基,而倒数第1个为简并碱基,这样做的好处是让它正好结合在mRNA的3’端连到Poly(A)尾巴的这个连接处,而不会结合到mRNA的别的地方。这样就保证了逆转录的起始位置正好是mRNA的3’端的序列终止位置。MMLV逆转录酶,这个酶有个特点,就是它在转录到mRNA的5’端末端的时侯,会在新合成的cDNA的3’末端,多加出几个C碱基来。江苏高通量转录组学主要技术转录组学可以直接测定每个转录本片段序列。

转录组学,基因组学,蛋白质组学的区别:蛋白组学针对的是全体蛋白,组要以2D-Gel和质谱为主,分为top-down和bottom-up分析方法。理念和基因组类似,将蛋白用特定的物料化学手段分解成小肽段,在通过质量反推蛋白序列,之后进行搜索,标识已知未知的蛋白序列。转录组学研究的是某个时间点的mRNA总和,可以用芯片,也可以用测序。芯片是用已知的基因探针,测序则有可能发现新的mRNA。基因组学研究的主要是基因组DNA,使用方法目前以二代测序为主,将基因组拆成小片段后再用生物信息学算法进行迭代组装。当然这只是第1步,随后还有繁琐的基因注释等数据分析工作。

全转录组学测序技术优势:文库优化:针对不同长度的序列采用两种文库构建方法,采用去核糖体的链特异性文库可以获得mRNA、lncRNA和circRNA的序列信息。数据全:全转录组测序完成后可获取4类主要RNA(miRNA,mRNA,lncRNA,circRNA)数据,可对这些数据进行标准分析及整合分析。关联全:通过对mRNA/miRNA/lncRNA/circRN序列测定及后续分析,深入开展全转录组调控网络(ceRNA网络)分析。样本类型:细胞,组织,体液、血清、血浆、全血,总RNA等。建议总RNA起始量:>15μg,浓度≥200ng/μL)。转录组学能准确地识别可变剪切位点及cSNP,UTR区域。

什么是转录组学测序?转录组广义上指在某一生理条件下,细胞内所有转录组产物的组合,包括:mRNA、ncRNA、rRNA等;狭义上指所有mRNA的组合。转录组测序的研究对象为特定细胞在某一功能状态下所能转录出来的所有RNA的总和,主要包括mRNA和ncRNA。转录组具有时间特异性、组织特异性、空间特异性等特点。无参转录组和有参转录组的区别?如果所研究的物种有组装注释质量较好基因组序列,且和该基因组序列比对效率较高,那么可以采用有参转录组的分析策略,直接进行分析。反之,则需要按照无参转录组的分析策略进行转录本组装,构建unigene库,然后进行后续分析。转录组学测序样品纯度要求,电泳检测28S:18S至少大于1.8。上海高通量转录组学方法

转录组学广义上指在某一生理条件下,细胞内所有转录组产物的组合。广州高通量转录组学研究方法

全转录组测序:狭义的转录组默认只包含mRNA,但是广义的转录组指的是细胞或组织中所有转录产物的汇合,其中包含mRNA和非编码RNA(non-codingRNA,ncRNA)。非编码RNA目前的研究多集中在具有调控功能的smallRNA(以miRNA为表示),长链非编码RNA(longnon-codingRNA,lncRNA)和环状RNA(circularRNA,circRNA)上,而这几类ncRNA的调控对象都和mRNA有关。因此,全转录组即包含了ncRNAs和mRNA。全转录组测序即对以上四种ncRNA进行测序,并分析这四者之间复杂的相互作用关系。广州高通量转录组学研究方法

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