转录组及转录组测序(RNA-seq):转录组即特定细胞在某一功能状态下所能转录出来的所有RNA的总和,包括mRNA和非编码RNA。转录组测序(RNA-seq)主要通过高通量测序研究特定组织或细胞在某个时期转录出来的mRNA的表达量,进而对相关基因和表型的关系进行分析。本质上讲RNA-seq就是在用一种新的方法实现“基因决定性状”的经典思路。在RNA-seq之前用于研究基因组表达分析的主要技术是基因芯片,不过由于高通量测序成本的下降,RNA-seq的运用愈来愈普遍。转录组学可以直接测定每个转录本单核苷酸分辨率的准确度。广东SmalIRNA转录组学应用
RNA-Seq转录组学技术优势:相比基因芯片和标记的碱基序列的测序方法,RNA-seq具有一定的优越性。与基因芯片相比,RNA-Seq不只可以在更高的分辨率下用来测量基因的表达水平情况,还可以揭示未知的转录组和拼接亚型,并为选择性拼接亚型提供定量分析。相对于传统的芯片杂交平台,转录组测序无需预先针对已知序列设计探针,即可对任意物种的整体转录活动进行检测,提供更精确的数字化信号、更高的检测通量以及更普遍的检测范围,是目前深入研究复杂性转录组的强大工具。鉴于这些优势,RNA-Seq很快就被应用到关于瘤病相关研究的多个方面。贵州全长转录学组质谱鉴定转录组学无需了解物种基因信息,能够直接对任何物种进行转录组分析。
转录组学测序结果的影响因素?RNA的降解严重影响测序的质量,RNA降解后,加入poly-A后无法捕获纯化mRNA,因此,随机引物反转录无法得到全部的cDNA,导致测序结果出现明显的3‘-和5’-偏向。文库中的poly-A多聚物的存在会对测序信号产生干扰,影响测序结果的准确性;同时由于转录组中转录本的丰度不一致,实验前需要对样本进行均一化处理,否则高丰度的表达基因会掩盖低丰度表达基因,导致寻找新基因失败或者是获得大量无意义的重复序列。
单细胞转录组学基本概念:普通转录组的思路也可以应用到单细胞转录组。普通转录组相当于把一群细胞混合到一起去提取RNA,获得的是每个细胞中RNA表达量的平均值。单细胞是把每个细胞单独分出来去提取RNA,然后建库测序,获得是是单个细胞的表达值。在每个细胞里面基因的表达具有随机性,且存在异质性。而且这些细胞群中会存在不同类型的细胞,尤其是当我们对整个组织进行测序时,它们本身就是由不同类型的细胞组成的,而我们用普通转录组来测序,相当于掩盖住了这些不同的细胞类型的差异,展示的是整个组织的平均的状态,所以说单细胞从这个来看跟普通转录组就不同在是用一个细胞测,不是用一堆细胞测。转录组学测序比其他研究方法有哪些优势?
转录组学:随着越来越多的基因组序列相继被测定,生命科学的研究进入了后基因组时代,各类组学技术得到迅速地发展与普遍地应用包括以基因为研究对象的基因组学(Genomics)、以转录过程为研究对象的转录组学(Transcriptomics)。意义:1.转录组谱可以提供特定条件下某些基因表达的信息,并据此推断相应未知基因的功能,揭示特定调节基因的作用机制.2.通过基于基因表达谱的分子标签,不只可以辨别细胞的表型归属,还可以用于疾病的诊断.3.转录组的研究应用于临床的另一个例子是可以将表面上看似相同的病症分为多个亚型,尤其是对原发性恶性瘤,通过转录组差异表达谱的建立,可以详细描绘出患者的生存期以及对药物的反应等。转录组学分析转录本的结构和表达水平的同时,还能发现未知转录本和稀有转录本。广东SmalIRNA转录组学应用
相对于传统的芯片杂交平台,转录学组测序无需预先针对已知序列设计探针。广东SmalIRNA转录组学应用
转录组学(Transcriptomics),是一门在真整体水平上研究细胞中基因转录的情况及转录调控规律的学科,从RNA水平研究基因的表达情况。转录组测序是通过二代测序平台快速全方面地获得某一物种特定细胞或组织在某一状态下的几乎所有的转录本及基因序列,可以用来研究基因表达量、基因功能、结构、可变剪接和预测新的转录本等等。转录组(transcriptome),是指特定生长阶段某组织或细胞内所有转录产物的汇合,狭义上指所有mRNA的汇合。转录组学即特定细胞在某一功能状态下转录出来的所有RNA的总和,包括mRNA和非编码RNA。广东SmalIRNA转录组学应用
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