乙酰化修饰蛋白质组学分析:乙酰化修饰蛋白质组学分析是指从蛋白质组学的水平分析蛋白质乙酰化修饰,包括乙酰化蛋白质的鉴定和定量。提供基于质谱的乙酰化蛋白组研究服务。蛋白质乙酰化包括组蛋白乙酰化和非组蛋白乙酰化。组蛋白乙酰化主要是赖氨酸乙酰化,已在基因转录调控作用方面被普遍的研究。非组蛋白乙酰化构成了哺乳动物细胞中乙酰化蛋白的主要部分,参与了所有主要生物过程,包括蛋白质的定位、转移、功能和降解,遗传物质的转录和复制等。除了重要的生物学功能以外,乙酰化蛋白质及其调控酶还与衰老和多种疾病(如神经变形紊乱、心血管疾病等)紧密相关。因此,对乙酰化修饰蛋白质组进行研究有助于进一步探索细胞的生命活动与了解相关疾病的发病机制。乙酰化修饰对细胞核内转录调控因子的刺激有着非常重要的作用。上海氧化修饰蛋白质组学主要方式
蛋白质乙酰化修饰鉴定流程:1. 组织/细胞破碎,提取、提纯目的蛋白质。2. 使用胰蛋白酶将目的蛋白酶解成多肽片段。3. 使用高效特异性乙酰化抗体对乙酰化修饰肽段进行免疫富集。4. 使用LC-MS/MS对富集的乙酰化肽段进行鉴定分析。5. 数据分析,并对鉴定的乙酰化位点的生物学功能进行解释预测。随着蛋白质组研究的发展,我们越来越深刻地意识到,对于生物体生命活动的管理和调控过程,密切相关的不只是单个蛋白质层面的修饰状态,更重要的是研究蛋白质组学水平研究在翻译后修饰的动态变化。高质、高效的蛋白质翻译后修饰富集技术和丰富的、准确的定量手段使得研究蛋白质水平的翻译后修饰组学成为现实,借助这些组学研究手段能够实现不同生理病理状态下生物样本在翻译后修饰水平上的定量比较,深入地揭示翻译后修饰水平的波动与生物生命活动的密切联系。上海棕榈酰化修饰蛋白质组学价钱目前对乙酰化修饰的功能研究主要集中在对细胞转录调控,以及对代谢通路的调控这两个方面。
蛋白质乙酰化修饰组学技术:乙酰化修饰是体内保守的可逆转的蛋白修饰,对细胞核内转录调控因子的刺激有着重要的作用。此外,还存在的非组蛋白乙酰化修饰参与了代谢通路及代谢酶活性的调节。采用肽段预分离降低高丰度组蛋白对蛋白乙酰化鉴定的影响,再结合免疫共沉淀通过抗体富集乙酰化的肽段,从而实现乙酰化的鉴定及定量。样品要求:1、SDS-PAGE条带:5个以上可见考染条带。2、溶液(目标蛋白质):目标蛋白总量>50μg,目标蛋白浓度>80%。3、溶液(大规模混合蛋白质):蛋白总量>1mg,蛋白浓度>1μg/μl。
蛋白质乙酰化修饰的功能:目前对乙酰化修饰的功能研究主要集中在对细胞转录调控,以及对代谢通路的调控这两个方面。在众多乙酰化修饰的蛋白质中,研究较多的要数细胞核中包围DNA的组蛋白了。组蛋白和DNA缠绕构成核小体,组蛋白的甲基化、乙酰化修饰能够调节DNA缠绕的松紧度,从而对基因表达进行调控,因此,组蛋白的翻译后修饰是表观遗传学研究中的重要一环。另外,研究也发现乙酰化修饰普遍存在于人的多种代谢酶之中,并且参与调控代谢通路以及代谢酶的活性。其中在肝脏这样的代谢中就存在着多种代谢酶被高度乙酰化。蛋白质翻译后修饰的作用主要是改变蛋白质的定位。
蛋白质翻译后修饰分析策略:早期蛋白质组研究的大部分工作集中在细胞生长的不同时期,或疾病或有丝分裂原刺激后的蛋白质表达水平的变化。然而,许多生命过程不只受蛋白质的相对丰度控制,还受时空分布可逆的翻译后修饰控制。因此,揭示翻译后修饰的规律是了解蛋白质复杂性和多样的生物学功能的前提。蛋白质的翻译后修饰是一个复杂的过程。目前,发现的比较常见的修饰类型是糖基化、泛素化和磷酸化。样品中翻译后修饰蛋白质含量低、动态范围广给相关研究带来了很大的挑战。基于翻译后修饰蛋白的异质性和相对丰度低的特点,主要利用凝胶、生物质谱和生物信息学工具对其进行研究。用于PTM分析的质谱方法类似于用于“常规”蛋白质鉴定的方法,包括自下而上、自中而下和自上而下的蛋白质组学分析。自中而下的蛋白质组学技术可用于组蛋白修饰的分析。蛋白质甲基化修饰组学一般流程
泛素化修饰是一种重要的翻译后修饰。上海氧化修饰蛋白质组学主要方式
蛋白质翻译后修饰在蛋白质中磷酸化位点分析时应该注意些什么问题?覆盖率:覆盖率越高,检测和鉴定含有修饰基团的肽几率就越大。修饰位点的占有率:被修饰的蛋白质的百分比低,则检测到修饰肽的机会会随之减少。如果百分比较高(> 30%),则有助于识别修饰位点。棕榈酰化蛋白修饰质谱鉴定方法:S-棕榈酰化的主要功能是促进蛋白质与细胞膜的结合。蛋白质可以由一个棕榈酰基组成,也可以与更多棕榈基或与其他脂质,如豆蔻酰基。由于对S-棕榈酰化蛋白分析仍然具有挑战性,由于S-棕榈酰化修饰蛋白亚水平以及疏水性和潜在不稳定的硫代质链的S-脂酰化肽。现在常用的几种方法可以捕获S-脂酰化蛋白以及对目标修饰蛋白进行捕获。上海氧化修饰蛋白质组学主要方式
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