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湖北动物靶向代谢组学定量分析

来源: 发布时间:2022-01-26

代谢组学介绍:通过液质联用(LC-MS)方法检测生物体受外界刺激前后体内大多数小分子代谢物的动态变化,重点寻找在实验组和对照组中有明显变化的代谢物,进而研究这些代谢物与生理病理变化的相关关系,其研究对象大多是分子量1500Da以内的小分子物质。技术优势:较高的灵敏度、分辨率;较宽的动态范围;适合对标本中未知代谢物的探索研究;适合于生物样本中复杂代谢产物的检测和潜在标志物的鉴定。代谢组学应用方向: 土壤代谢组学。研究土壤中有机质及土壤微生物代谢含量变化及相互作用,了解土壤微生物多样性及其碳代谢能力,为探索调节、控制和改善土壤环境质量提供重要的参考。代谢组学关注的对象是分子量在1000以下的小分子化合物。湖北动物靶向代谢组学定量分析

靶向代谢组学分析成功的关键因素是准确度、高通量和可靠性。靶向代谢组学鉴定一般采用 GC/MS 系统的选择性离子监测 (SIM),或在三重串联四极杆 LC/MS 系统上用多反应离子监测 (MRM) 进行靶向 MS/MS。SIM 比全扫描图谱采集具有更高的灵敏度,在单四极杆质谱中,这种灵敏度增强的原因是延长了所选择离子的采集时间。因为监测的是一个很小的质量窗口,所以质量色谱图只表示对极为特定质量的检测。在大多数情况下,灵敏度可以提高 10 倍。MRM 是进行质谱定量的选择方法,与 SIM 相比更为灵敏、更加特异。可以产生独特的碎片离子,可对非常复杂基质中的目标化合物进行监测和定量。河南常规靶向代谢组学服务代谢组学作为系统生物学的一个重要的分支,与其他组学相比有着其特有的优势。

代谢组学概念:基因与蛋白质的表达紧密相连,而代谢物则更多地反映了细胞所处的环境,这又与细胞的营养状态,药物和环境污染物的作用,以及其它外界因素的影响密切相关。因此有人认为,“基因组学和蛋白质组学告诉你什么可能会发生,而代谢组学则告诉你什么确实发生了。”代谢组学的概念来源于代谢组,代谢组是指某一生物或细胞在一特定生理时期内所有的低分子量代谢产物,代谢组学则是对某一生物或细胞在一特定生理时期内所有低分子量代谢产物同时进行定性和定量分析的一门新学科。它是以组群指标分析为基础,以高通量检测和数据处理为手段,以信息建模与系统整合为目标的系统生物学的一个分支。

什么是非靶向代谢组学、靶向代谢组学?(1) 非靶向代谢组学(Untargeted metabolomics)即非目标代谢组学或发现代谢组学,无偏向性地对所有小分子代谢物(一般相对分子量小于1000)同时进行检测分析的代谢组学。(2) 靶向代谢组学(Trgeted metabolomics)则为目标性代谢组学,着重对于设定好的目标代谢物进行定性、量检测分析和研究。相比于其他组学,代谢组学有哪些特殊的优势?系统生物学有基因组学、转录组学、蛋白组学和代谢组学。代谢组学作为系统生物学的一个重要的分支,与其他组学相比有着其特有的优势,主要体现在以下几点:(1) 基因与蛋白质表达的微小变化会在相应代谢物水平上得到放大,更容易被检测。(2) 代谢物的种类要远小于基因和蛋白的数目。(3) 可与生物表型变化建立直接相关性。代谢组学的研究方法与蛋白质组学的方法类似。

代谢组学样品收集方法及所需样本量是什么?(1) 血清样品: 避免反复冻融。血液收集在离心管中静置30分钟进行凝血。8000rpm离心10分钟,取上清分装到冻存管中,放置液氮中或-80度冻存;单个样本要求体积为50μL。(2) 尿液样品:临床样本请全部取清晨第1次尿液。尿液直接分装到离心管中,8000rpm离心10分钟,取上清分装到冻存管中,放置液氮中或-80度冻存,-80度冻存;单个样本要求体积为100μL。(3) 其他样本收集办法请咨询谱领工作人员。代谢组学技术得到了迅速发展。广东非靶向代谢组学分析

代谢组学先进分析检测技术结合模式识别和**系统等计算分析方法是代谢组学研究的基本方法。湖北动物靶向代谢组学定量分析

代谢组学尿液样本收集:1)取空腹晨尿、中段尿(临床)或晨间1 h尿(动物)于50 mL离心管中;2)4 ℃ 下10000 rpm离心10 min取上清,用1.5 mL离心管分装,保存于-80 ℃。3)动物1 h尿量不够的情况下,可分多次收集尿液;如需收取24 h尿液,需要使用带低温装置的代谢笼收集,并且及时冻存样本。4)收集完尿液样本后,建议使用液氮淬灭15 min后,再分装多管后于-80 ℃冻存。组织样本收集:动物组织(包括脑、心、肝、脾、肺、肾、肌肉和皮肤等;软体动物如血吸虫):1)取适量组织,用预冷的PBS缓冲液或生理盐水清洗干净;2)迅速剥去非必需的脂肪和结缔组织,再用PBS缓冲液或生理盐水冲洗干净;3)用干净的无尘吸水纸吸干水分,将组织分成50-100 mg / 管分装待用;4)管子上做好标记后迅速放入液氮中冷冻处理至少15 min,-80 ℃冻存;干冰运输。湖北动物靶向代谢组学定量分析

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