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丙酰化修饰蛋白质组学一般流程

来源: 发布时间:2022-01-26

蛋白质糖基化修饰组学技术:糖基化是在酶的控制下,蛋白质或脂质附加上糖类的过程,发生于内质网和高尔基体等部位。在糖基转移酶作用下将糖转移至蛋白质,和蛋白质上的氨基酸残基共价结合。蛋白质经过糖基化作用,形成糖蛋白。糖基化是对蛋白的重要的修饰作用,有调节蛋白质功能作用。凝素亲和法是目前糖蛋白质组学中应用普遍的分离富集方法。凝集素(lectin)是一类糖结合蛋白质,能专一识别某一特殊结构的单糖或聚糖中特定的糖基序列而与之结合,它们与糖链可逆非共价结合,糖蛋白或糖肽被凝集素捕获之后,通常用特定的单糖通过竞争结合凝集素将糖蛋白或糖肽洗脱下来。蛋白质经过酶解后利用凝集素(lectin)富集N-糖基化肽段,然后用N-糖酰胺酶(PNGase)在H218O中切除连接在天冬酰胺残基(Asn)上的糖链。蛋白质翻译后修饰组学磷酸化修饰具有简单的特性。丙酰化修饰蛋白质组学一般流程

蛋白磷酸化检测方法:一、Western Blot检测方法优势:1. WB方法简便,多数实验室具备Western Blot设备条件。2. 许多磷酸化抗体十分灵敏,能够检测低至10ug的蛋白样品。3. 对于丰度低的蛋白,可以先通过IP使用目标蛋白的抗体对目标蛋白进行富集,再进行WB检测被磷酸化的蛋白,检测效率可以提高几倍甚至几十倍。二、质谱检测方法:Western Blot的方法虽然简便,但是对于大规模分析复杂的生物样品的磷酸化水平就不再适用了。而质谱却能很好的解决这一问题。依靠高准确度质谱仪,如今快速准确分析细胞中高丰度蛋白的磷酸化修饰已是非常简单的事。具体的检测方法为先通过SDS-PAGE胶,或者2D-PAGE胶等分离目标蛋白,将含有目标蛋白的条带切下,胰酶消化,LC-MS/MS检测分析蛋白序列和相应位点的磷酸化修饰。这个方法适用于同时检测多个目标蛋白的磷酸化水平。北京琥珀酰化修饰蛋白质组学一般流程蛋白质磷酸化修饰组学具有全方面性。

翻译后修饰蛋白组学分析:在蛋白翻译后修饰方式的鉴定过程中,蛋白会首先被酶切成肽段,然后进入质谱进行分析。通过质谱分析,得到的是一系列肽段的分子质量信息。对于某一个特定肽段而言,在没有发生任何翻译后修饰的情况下,其序列信息和分子量是确定的。当它发生了某种翻译后修饰之后,例如磷酸化修饰,由于序列信息和分子量是确定的,磷酸根的分子量也是确定的。在质谱检测过程中发现其中的部分肽段的分子量刚好增加了一个磷酸根的分子量,假设这个肽段就发生了磷酸化修饰,再通过二级质谱图进行二次确认。

翻译后修饰蛋白组:翻译后修饰蛋白组分析是指在组学水平上对存在翻译后修饰的蛋白质进行分析。翻译后修饰蛋白组是指细胞或组织等整体水平上的翻译后修饰蛋白。蛋白质的翻译后修饰(Post Translational Modifications, PTMs)是蛋白质在翻译中或翻译后经历的一个共价加工过程。蛋白翻译后修饰通过在一个或多个氨基酸残基上加修饰基团或通过蛋白质水解去基团而改变蛋白质的性质,调节蛋白质的功能。经过翻译后修饰的蛋白质称为翻译后修饰蛋白。目前,已知的蛋白质翻译后修饰主要包括糖基化、磷酸化、乙酰化、泛素化、二硫键配对、甲基化和亚硝基化等等。蛋白质磷酸化修饰组学具有可靠性。

蛋白质磷酸化修饰组学技术优点:1、全方面性:磷酸化蛋白质组学以整个细胞蛋白为研究对象,研究内容包括了细胞内具有生命功能的蛋白,如细胞增生、细胞分裂和细胞分化等相关蛋白,因而研究更为全方面。2、可靠性:传统的生物学研究蛋白质磷酸化往往针对特定条件,以两个蛋白或更多蛋白之间的相互作用为出发点,具有局限性,缺乏整体认识。磷酸化蛋白质组学则可检测不同蛋白激酶及磷酸化酶对同一个蛋白磷酸化程度的影响,因而结果具有普遍性和可靠性。3、有效性:磷酸化蛋白质组学反映的是细胞内真实发生的事件,在一次试验中考虑了不同变量,克服了生物学中逐步添加变量的缺陷。4、探索性:磷酸化蛋白质组学以细胞内蛋白为研究对象,相对于传统的生物学研究以及蛋白质芯片,更易发现未知的新磷酸化位点和磷酸化蛋白质。如果可以联合生物学技术,则可以发现具有磷酸化或者去磷酸化功能的酶。在众多乙酰化修饰的蛋白质中,研究较多的要数细胞核中包围DNA的组蛋白了。北京琥珀酰化修饰蛋白质组学一般流程

蛋白质乙酰化修饰,顾名思义指的就是在蛋白质原有基础上面嫁接上乙酰化基团。丙酰化修饰蛋白质组学一般流程

蛋白质磷酸化修饰定义?在哺乳动物细胞生命周期中,大约有1/3的蛋白质发生过磷酸化修饰,在脊椎动物基因中,约有5%的基因编码的蛋白质是参与磷酸化和去磷酸化过程的蛋白激酶和磷酸酶。它可以通过激发、调节诸多信号通路进而参与调控生物体的生长、发育、逆境应激、疾病发生等多种生命过程,一直是生物学研究的重点与热点。蛋白磷酸化是指在激酶催化作用下把ATP或者GTP的磷酸基团(P04)转移到不同种类的氨基酸上(主要包括丝氨酸S、苏氨酸T、酪氨酸Y),从而使蛋白质发生翻译后修饰的过程。丙酰化修饰蛋白质组学一般流程

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