免疫共沉淀与免疫沉淀技术所使用的原理与方法大致相似，所不同的是，在免疫共沉淀中，对靶蛋白的结合与沉淀由另一个与之发生相互作用的蛋白替代。在免疫共沉淀或免疫沉淀的基础上，通过进一步与其它技术的结合，如聚丙烯酰胺凝胶电泳，还可进一步对靶蛋白的的分子量等特性进行鉴定。

免疫沉淀（Immunoprecipitation，IP）：利用抗原抗体特异性反应，对某个特定蛋白纯化富集的方法，主要过程包括捕获和固定。(2)免疫共沉淀（Co-Immunoprecipitation，CoIP）：CoIP是在IP实验的基础上进行的扩展，主要用于蛋白之间的互作研究，常被用于鉴定特定蛋白复合物的中已知或未知的蛋白组分。其原理是基于抗体与抗原（靶蛋白）之间的特异性结合，此时如果样品溶液中存在能与靶蛋白相互作用的目的蛋白，会一同被拉下来，随后利用SDS-PAGE，WesternBlot等方法对得到的目标蛋白进行分析，进而证明两者间的相互作用。

Co-IP内源检测需注意抗体选择、实验条件、样本处理及验证，确保结果准确可靠！湖北免疫沉淀CoIP WB检测

IP-WB（免疫沉淀-Western Blot）技术的缺点主要包括以下几个方面：抗体特异性要求：IP-WB技术对抗体的特异性要求极高。如果抗体特异性不强，可能会导致非特异性结合，增加背景噪声，影响结果的准确性。低丰度蛋白检测难度：由于IP-WB技术的灵敏度限制，对于低丰度的蛋白质相互作用，可能难以检测到。操作复杂性：IP-WB技术涉及多个步骤，包括样品制备、免疫沉淀、电泳分离和Western Blot检测等，操作相对复杂，需要一定的实验经验和技能。结果解读难度：Western Blot结果可能受到多种因素的影响，如蛋白表达水平、抗体亲和力等，结果解读可能具有一定的难度。虽然IP-WB技术存在一些缺点，但通过选择特异性强的抗体、优化实验条件、提高实验技能等方法，可以很大程度地减少这些缺点对实验结果的影响。湖北免疫沉淀CoIP WB检测Co-IP技术可靠，但需注意潜在限制与影响因素，综合验证确保准确性！

CoIP-Mass和CoIP-WB检测要点：

互作蛋白筛选和验证：数据分析以非标定量信号强度（LFQintensity和FC>10）作为强阳筛选，以文献查阅，功能匹配，批量CoIP-WB验证，提高验证成功率。理想CoIP-MS结果的蛋白定量都到超过1000种蛋白。其中绝大部分蛋白为非特异结合或背景蛋白。以目的蛋白的富集信号强度和差异倍数作为参考（相对强信号和差异），分析实验组中明显定量较高且差异较大的蛋白，作为重要候选蛋白。同时对重要候选蛋白进行STRING互作分析，文献分析，目的蛋白功能匹配分析，选择Top的4-5个蛋白进行CoIP-WB验证，提高CoIP-WB成功率。

免疫共沉淀（Co-Immunoprecipitation,Co-IP）实验在生物学和医学研究中具有广泛的应用范围。以下是其主要的应用领域：1.蛋白质相互作用研究（检测蛋白质相互作用/确定蛋白质复合物的成员）；2.细胞信号传导研究；3.蛋白质功能和结构研究；4.疾病机制研究；5.其他应用：蛋白纯化，蛋白质翻译后修饰研究。综上所述，免疫共沉淀实验在蛋白质相互作用研究、细胞信号传导研究、蛋白质功能和结构研究以及疾病机制研究等多个领域都具有广泛的应用价值。Co-IP揭示蛋白互作，验证复合物形成，探究信号通路，助力蛋白研究！

CoIP-Mass应用场景：CoIP-Mass：用于构建目的蛋白的蛋白互作组数据，或用于不同遗传背景/实验条件下的互作组差异。CoIP-WB：用于验证目的蛋白和候选蛋白的相互作用关系，或用于不同遗传背景/实验条件下的互作变化。

CoIP-Mass和CoIP-WB技术价值：（1）蛋白质相互作用数据是机制研究的重要基础内容，体现机制研究的严谨性，能明显提高临床基础类研究文章的档次。（2）细胞内蛋白互作处于动态变化过程，在不同条件下可发生动态变化，蛋白动态互作组检测，是蛋白互作机制的亮点。（3）蛋白互作，往往是结构域或部分关键区段的互作，可通过蛋白区段拆分，进一步明确互作的结构域，提升机制研究的高度，为靶点转化提供关键切入点。 Co-IP高特异灵敏，适用多样本，兼容质谱，操作简便，优势大！陕西免疫共沉淀检测CoIP

Co-IP技术简便、特异、灵敏，是探索蛋白质相互作用和疾病机制的重要工具！湖北免疫沉淀CoIP WB检测

CoIP-Mass和CoIP-WB检测要点：

试验设计：尽量进行试验组别设计和进行生物学重复检测，提高后续验证的阳性率。常规过表达单组（AbIPvsIgGIP）；动态互作组学（实验组vs对照组vsIg组）。根据目的设计适当的生物学重复。如果后续以CoIP-Mass数据进行互作组标准分析，则需要3-4组生物学重复；如果后续以寻找关键互作蛋白，进行机制深入研究，则建议1-2次生物学重复。经验显示单次重复假阳性率90%。

蛋白表达和细胞量：细胞用量要求大(2-10e7细胞量），建议不少于5e7（金标准：320g离心细胞量50μl，保障项目用量）。低表达蛋白，建议使用过表达组进行检测。蛋白表达可根据WB结果或初步根据数据库判定（ProteomicsDB；HumanProteinAtlas）。 湖北免疫沉淀CoIP WB检测