用qPCR法进行rcAAV复制型腺相关病毒检测时,出现扩增效率超出标准要求(低于83.3%或高于110%)的原因有哪些?①设计的引物探针不适用:重新分析靶标序列进行设计。②标曲浓度设定太高,超出标曲线性范围:对范围进行验证,选取合适标曲范围。③人员操作问题,如稀释错误、制备过程震荡时间过长等:人员上岗前应接受多面培训并做到熟练操作,考核合格后方可上岗。④移液器未校准或品质问题导致量取不准:定期对移液器进行校准并选择好品质移液器。南京正扬有重组腺相关病毒检测试剂盒吗?深圳qPCR法病毒检测价格
病毒作为基因载体已普遍用于基因和细胞医治产品。目前常见的病毒载体包括慢病毒(Lentiviral)、逆转录病毒(Retrovirus)、腺病毒(Adenovirus)、腺相关病毒(AAV)等。在生产过程中,如果被有复制能力的病毒污染,或载体发生重组,病毒载体中可能会混杂有复制型病毒。复制型慢病毒/逆转录病毒(RCL/RCR)可将病毒基因组整合到细胞基因组中,存在激 活原ai基因、破坏抑ai基因造成二次中瘤的风险;同时因其具有复制性,且用水泡性口炎病毒糖蛋白(VSV-G)替代了env编码的包膜糖蛋白,提高了病毒的嗜性范围,增加RCR/RCL带来的潜在风险;而如果出现复制型腺相关病毒(rcAAV),其则会在被感 染的细胞中表达cap或rep基因,容易导致意外的免疫反应。因此,各国法规对复制性 病毒检测都提出了明确要求。苏州复制型逆转录病毒检测注意事项南京正扬有复制型病毒检测试剂盒试剂盒的装量是多少?
《CAR-T细胞治 疗产品质量控制检测研究及非临床研究考虑要点》一文提到:目前RCR/RCL病毒检测方法主要有指示细胞培养法、ELISA法(p24蛋白测定)、PCR/q-PCR法(通过psi-gag或VSV-G聚合酶链反应)和转录酶活性测定法(PERT)等。其中,利用指示细胞培养法对生产过程中的病毒(上清液、病毒生产终末期细胞)存在的RCL进行培养扩增,并在培养终点进行重复检测是FDA推荐的RCL检测方法。
《CAR-T细胞治 疗产品质量控制检测研究及非临床研究考虑要点》一文提到:目前RCR/RCL病毒检测方法主要有指示细胞培养法、ELISA法(p24蛋白测定)、PCR/q-PCR法(通过psi-gag或VSV-G聚合酶链反应)和转录酶活性测定法(PERT)等。其中,利用指示细胞培养法对生产过程中的病毒(上清液、病毒生产终末期细胞)存在的RCL进行培养扩增,并在培养终点进行重复检测是FDA推荐的RCL检测方法。
美国FDA要求对于采用γ-逆转录病毒载体和慢病毒载体的产品,需要在整个生产过程及不同阶段进行RCR复制型逆转录病毒/RCL复制型慢病毒检测,针对载体生产用主细胞库、工作细胞库、生产终末细胞、载体上清液及在体外培养超过4天的载体转到细胞进行检测。针对慢病毒载体使用时RCL的检测,除了金标准——指示细胞培养法,还需要选择2种不同原理的快检方法对其进行补充检测。RT-PCR法具备操作便捷快速、特异性好、灵敏度高、稳定性好等优点,是RCR/RCL补充检测的优 选方法。重组腺相关病毒检测方法有哪些?
用qPCR进行rcAAV复制型腺相关病毒检测时,哪些因素会对检测结果准确性和方法灵敏度存在较大影响?前处理过程杂质干扰的去除对qPCR法宿主细胞残留DNA检测结果有着较大影响。样品的前处理操作步骤对DNA检测结果的准确度影响较大,通常采用加样回收试验来进行验证并确定可接受的偏离限度,内标回收率在50-150%的范围内都可以接受。样品提取步骤较为复杂,需要特别注意,操作不当不但可能影响回收率还可能引入环境污染。欢迎联系南京正扬!复制型病毒检测试剂盒要求有哪些?南京RCL病毒检测产品
为什么要做复制型病毒检测?深圳qPCR法病毒检测价格
南京正扬生物科技有限公司自主研发生产的rcAAV复制型腺相关病毒检测试剂盒有哪些优点?①试剂盒经过独特的设计开发,可以防止PCR产物污染;②产品检测灵敏度高;③重复性好,同一样品重复检测20次,CV<15%;④检测时间短,从样品提取纯化到出结果只需2.5h;⑤适应性强,针对不同机型,不同实验室条件,检测结果稳定;⑥可提供自动化服务,自动化完成样品核酸提取纯化;⑦货期短,供应快;
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