而在指数增长期，由于底物充足，聚合酶活性高，反应产物以指数形式积累，且与初始模板量存在定量关系，因此，在该时期对模板起始量进行定量分析准确且重复性比较好。Ct值，是在指数增长期内，荧光信号到达荧光检测阈值时所经历的循环数，其中C循环(Cycle)，t阈值（threshold)。每条扩增曲线的Ct值都与初始模板量的对数存在线性关系，初始模板的拷贝数浓度越高，对应的Ct值越小;反之则越大。因此，先根据已知拷贝数浓度标准品的扩增曲线拟合出标准曲线方程，再将样本扩增曲线的Ct值代入标准曲线方程中，便可计算未知样本初始模板的拷贝数浓度，从而实现定量分析。q225pcr无需参比染料、无需定期校准，更加简化的操作流程与减轻的维护负担只为更好地专注于实验。华南地区准确qPCR仪供应商

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PCR：Polymerase chain reaction. 是体外模拟生物的DNA 复制。需要DNA 聚合酶，DNA 模板，两端引物，脱氧核苷酸dNTPs( dATP, ACTP, dGTP, dTTP),以及适当的缓冲体系。PCR 产物的增长形式为２N (如果各种试剂和外部所加条件均理想化，N 是循环数)。实际中，扩增效率不为100％。Real time PCR 是定量PCR 的一种，当然是在PCR 的基础上发展出来的。（普通）PCR 包含很多因素，属性，如：试剂，温度，循环数，程序，PCR 产物（扩增子，amplicon）的量，扩增曲线（扩增子累积曲线），掺错率，扩增子长度。一般来说，人们关心的是扩增子的量。而real time PCR 主要利用的是扩增曲线（amplification curve）, 循环数；扩增子长度，扩增效率，扩增子多少，也加以考虑。

Taqman探针是由5’端标记有荧光报告基团和3’端标记有淬灭基团以及与目标基因特异性结合的寡核苷酸序列组成。探针完整时，报告基团发射的荧光信号被淬灭基团吸收，此时仪器不会检测到荧光信号。在PCR扩增时，模板DNA变性解链，Taqman探针特异性结合到目标基因处，而Taq酶具有5’-3’核酸外切酶活性，延伸至探针结合处，可将探针水解，使荧光报告基团和淬灭基团分离，从而检测到荧光信号，荧光信号的强度与扩增得到的dsDNA的浓度成正比。荧光信号被仪器检测并采集得到“扩增曲线”，通过荧光信号的强度反映出体系中dsDNA的浓度。Taqman探针法因其特异性高，被地应用于等位基因鉴别、SNP分型、病原体和病毒检测、疾病耐药基因研究、多重定量等。Quantagene q225 系列荧光定量PCR 系统主要特点：精确定量、快速高效、小巧轻便。

定量方法包括相对定量和定量，两者的重要差异在于相对定量的结果是差异性的结果，涉及比较；而定量的结果是一个具体数值，对于基因表达量而言是基因的拷贝数，不涉及任何比较。相对定量首先需要确定一个内参基因，内参基因作用有检测样本材料中RNA是否降解、纠正样本加样的差异、校正cDNA合成速率差异及校正PCR抑制剂的影响，其本质作用是利用内参基因的Ct值对目的基因的Ct值进行均一化处理，常用的内参基因包括DH、β-actin、18S rRNA，使用的时候需要注意其序列必须是物种本身的特异序列，虽然其比较保守，但不同物种也会存在碱基差别。另外，相对定量需要确定参照物，因为涉及比较，参照物选择不同，所得的定量结果可能完全相反，经常选择的参照物一般是对照组或未处理组。由于在PCR扩增的指数时期，模板的Ct值和该模板的起始拷贝数存在线性关系，所以成为定量的依据。华南地区准确qPCR仪供应商

qpcr在扩增每个循环中模板DNA通过变性、复性、延伸三个阶段形成更多的子代DNA，为下一个循环提供模板DNA。华南地区准确qPCR仪供应商

常规PCR中，PCR产物通过凝胶电泳，然后进行成像分析，常规PCR只能通过终点法对扩增产物进行定性分析，而不能进行定量分析；荧光定量PCR中，PCR反应体系中加入了荧光分子，通过荧光信号的变化来反应扩增产物的变化，使PCR产物的实时检测成为可能。相对常规PCR而言，荧光定量PCR的主要优点是准确地确定初始模版拷贝数和较高的检测灵敏度；荧光定量PCR不仅可用于定性，如判断一段序列的有无，也可用于定量，如确定起始模版的拷贝数；常规PCR的定量方法，测定的都是PCR的终产物，而不是起始DNA拷贝数。而从图中可以看出，虽然相同模版在同一台PCR仪上进行96次扩增，终点处检测产物量不恒定，但96次PCR扩增曲线都有一个共同的拐点，即荧光定量PCR中Ct值的重现性，恒定的Ct值为荧光定量PCR的分析提供了理论依据。华南地区准确qPCR仪供应商

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